WB-轉膜
轉膜的作用與原理
轉膜的方法分類
轉膜方法主要包括濕轉法和半干轉法：
濕轉法?：適用于大多數蛋白質，尤其是高分子量蛋白（>100 kDa），轉膜時間長（60-90分鐘），需在低溫環境下進行?。
半干轉法?：適用于低分子量蛋白（<50 kDa），轉膜速度快（15-30分鐘），但對緩沖液和電流要求嚴格，容易發熱，需控制溫度?。
轉膜的具體操作步驟
組裝轉膜“三明治”?：按順序疊放陰極板海綿墊、濾紙、凝膠、PVDF膜、濾紙、海綿墊、陽極板，用玻璃棒輕輕滾動排除氣泡?。
設置轉膜參數?：通常使用恒流模式，電流為200-300 mA，時間1-2小時，高分子量蛋白可延長轉膜時間或降低電流?。
轉膜后處理?：取出膜后用麗春紅染色確認轉膜效果，再用TBST洗去染料?。
轉膜過程中常見問題及解決方案
轉膜后無信號?：可能原因包括電流/時間不足、膜未激活、方向裝反。對策是檢查轉膜裝置方向，確保PVDF膜充分激活?。
背景高或非特異性條帶?：可能原因包括膜未封閉完全、抗體濃度過高。對策是延長封閉時間（推薦5%脫脂奶粉封閉1小時），優化抗體稀釋比例?。
高分子量蛋白轉膜困難?：對策是改用0.45 μm厚的PVDF膜，延長轉膜時間至2小時以上?。
