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化學(xué)發(fā)光
發(fā)布日期：2025-12-17 16:58:23


化學(xué)發(fā)光



所謂化學(xué)發(fā)光，專業(yè)解釋為兩種或多種化學(xué)物質(zhì)發(fā)生氧化還原反應(yīng)，產(chǎn)生一個處于激發(fā)態(tài)的中間體，當(dāng)這個中間體回到基態(tài)時釋放出光子，其發(fā)光能量來自于化學(xué)反應(yīng)中釋放的能量，即化學(xué)能。這個過程分為兩種，直接發(fā)光和間接發(fā)光。

直接發(fā)光是最簡單的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，其標(biāo)記物（如吖啶酯）自身具有發(fā)光基團(tuán)，在免疫反應(yīng)后，僅需加入堿性溶液和過氧化氫等氧化劑，即可直接發(fā)生發(fā)光反應(yīng)，無需催化劑。
（直接化學(xué)發(fā)光）

間接發(fā)光其標(biāo)記物是酶（如ALP或HRP）。免疫反應(yīng)后，加入相應(yīng)的發(fā)光底物（如ALP對應(yīng)AMPPD，HRP對應(yīng)魯米諾），酶催化底物反應(yīng)并產(chǎn)生光信號，又稱酶促化學(xué)發(fā)光。
（酶促化學(xué)發(fā)光）

在化學(xué)發(fā)光體系中，目前常用的直接發(fā)光標(biāo)記物有魯米諾類和吖啶酯類，間接發(fā)光有辣根過氧化物酶（HRP）和堿性磷酸酶（ALP），發(fā)光底物以魯米諾、AMPPD為代表。

此應(yīng)用中最為普及的當(dāng)屬與免疫相結(jié)合的分析檢測手段，行業(yè)內(nèi)稱為化學(xué)發(fā)光免疫分析方法（CLIA），另外在科研實(shí)驗(yàn)里，蛋白電泳轉(zhuǎn)印后通過ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒檢測則是最為常用的。
Western Blot（蛋白免疫印跡）： 最經(jīng)典的應(yīng)用，用HRP標(biāo)記的二抗與目標(biāo)蛋白結(jié)合，加入化學(xué)發(fā)光底物后，HRP催化底物發(fā)光，通過曝光或化學(xué)發(fā)光成像來檢測蛋白條帶。