水產養殖環境(水體、底泥)中孔雀石綠的測定——高效液相色譜法（二）
6分析步驟
6.1樣品處理
6.1.1水樣處理
水樣經0. 45μm濾膜過濾后，準確移取100 mL水樣于三角瓶中，加入1 mL 0. 2 mol/L硼氫化鉀溶液，充分振蕩1 min?2 min,再加入3 mL甲酸調節水樣pH,待凈化。
6. 1.2底泥處理
準確稱取10. 00 g于50 mL離心管內，依次加入5 g酸性氧化鋁、10 mL乙腈和10 mL二氯甲烷、 1 mL 0. 2 mol/L硼氫化鉀溶液，渦旋振蕩1 min,超聲提取10 min,4 000 r/min離心10 min,將上清液移至100 mL的三角瓶。底泥用10 mL乙腈和10 mL二氯甲烷，重復提取一次，合并上清液。收集液加入適量甲酸,使甲酸所占樣液體積分數為3 % (V/V)，待凈化。另取10. 00g底泥樣品，按照GB17378. 5中規定的方法進行含水率測定。
6.2凈化
將已活化的MCX固相萃取小柱連接到固相萃取儀,將注射器通過SPE轉接頭連接到固相萃取柱上端，然后將水樣或底泥樣液加載到注射器,讓樣液以小于3 mL/min流速通過小柱。樣品過柱后，以5 mL 乙腈清洗三角瓶，轉入小柱，棄去流出液，減壓抽干。用5 mL 0. 25 mol/L乙酸銨甲醇溶液洗脫，減壓抽干。將洗脫液氮吹濃縮近干，用2. 00 mL 80%乙腈水溶液溶解殘渣，經過0. 22μm濾膜過濾，供液相色譜分析。
6.3測定
6.3. 1色譜參考條件
a) 色譜柱 :C18柱 ,250 mm× 4.6 mm(內徑),5 um,或性能相當者;
b) 色譜柱溫 :35°C;
c) 流動相 :乙腈+乙酸銨緩沖溶液(0.125 mol/L,pH4.5)=(80+20,V/V);
d) 熒光檢測器 :激發波長265 nm,發射波長 360 nm;
e) 流速 :1.5 mL/min;
f) 進樣量 :50 uL。
6.3.2 色譜測定與確證
將標準工作溶液和待測溶液分別注入高效液相色譜中,以 保留時間定性 ,以 待測液峰面積代入標準曲 線中定量 ,樣 品中孔雀石綠質量濃度應在標準工作曲線質量濃度范圍內。標準溶液和試樣溶液色譜圖參見附錄 A。
6.4 空白實驗
除不加試樣外 ,均按 6.1~6.3測 定步驟進行。
7 結果計算
水樣中孔雀石綠的含量按式(1)計算,測試結果需扣除空白值,并保留 3位有效數字。
式中:
X1 ——水樣中待測組分的含量 ,單位為毫克每升(mg/L);
cs——待測組分標準工作液的濃度 ,單位為微克每毫升(ug/mL);
As—— 待測組分標準工作液的峰面積 ;
A—— 樣品中待測組分的峰面積 ;
V——樣液最終定容體積 ,單位為毫升(mL);
V0——樣品體積 ,單位為毫升(mL)。
底泥試樣中孔雀石綠的含量按式(2)計算 ,測試結果需扣除空白值 ,并保留 3位有效數字。
式中:
X2一 樣品中待測組分的殘留量 ,單位為毫克每千克(mg/kg);
M — 樣品質量 ,單位為克(g);
W一 樣品含水率 ,單 位為質量分數(%)。
8 精密度
在重復性條件下獲得的 2次獨立測定結果的絕對差值與其算術平均值的比值(百分率),應符合附錄B的要求。
在再現性條件下獲得的 2次獨立測定結果的絕對差值與其算術平均值的比值(百分率),應符合附錄C的要求。
9 定量限
水體中孔雀石綠的定量限為 0.1 ug/L;底 泥中孔雀石綠的定量限為 1.0 ug/kg。
文章來源：《水產品獸藥殘留限量及監測方法查詢手冊》
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