水產養殖環境(水體、底泥)中孔雀石綠的測定——高效液相色譜法（一）
1范圍
本標準規定了水產養殖環境(水體、底泥)中孔雀石綠的高效液相色譜測定方法的原理、試劑和材料、 儀器和設備、分析步驟、結果計算、精密度和定量限。
本標準適用于水產養殖環境(水體、底泥)中孔雀石綠的測定。
2規范性引用文件
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GB/T 6682分析實驗室用水規格和試驗方法
GB 17378. 5海洋監測規范 第5部分:沉積物分析
3原理
孔雀石綠經硼氫化鉀還原為其代謝產物隱色孔雀石綠后，水樣經過濾，底泥試樣經乙腈和二氯甲烷混合溶劑提取，所得樣液加入甲酸酸化，經固相萃取柱富集、凈化,反相色譜柱分離，熒光檢測器檢測,外標法定量。
4試劑和材料
4.1試劑
4.1.1水:符合GB/T 6682 一級水的要求。
4.1.2乙腈(C2H3N)：色譜純。
4.1.3甲醇(CH3OH)：色譜純。
4.1.4二氯甲烷(CH2Cl2)：色譜純。
4.1.5甲酸(CH2O2)：分析純。
4.1.6冰乙酸(CH3COOH)：分析純。
4.1.7硼氫化鉀(KBH4)：分析純。
4.1.8乙酸銨(CH3COONH4)：分析純。
4.2溶液配制
4.2.1 3%甲酸溶液:移取3 mL甲酸，用水定容至100 mL。
4.2.2硼氫化鉀溶液(0.03 mol/L)：稱取0. 081g硼氫化鉀，用水溶解,定容至50 mL,現用現配。
4.2.3硼氫化鉀溶液(0. 2 mol/L):稱取0. 54 g硼氫化鉀，用水溶解,定容至50 mL,現用現配。
4.2.4乙酸銨溶液(5 mol/L):稱取38.5 g無水乙酸銨，用水溶解,定容至100 mL。
4. 2. 5乙酸銨甲醇溶液(0. 25 mol/L)：移取5 mL乙酸銨溶液用甲醇定容至100 mL。
4.2.6乙酸銨緩沖溶液(0. 125 mol/L):稱取9. 64 g無水乙酸銨溶解于1 L水中，用冰乙酸調pH至 4.5。
4.2.7 80%乙腈水:量取80 mL乙腈與20 mL水混合。
4.3標準品
孔雀石綠草酸鹽標準品[Malachite green oxalate salt,2(C23H25N2) ? 2(C2HO4) ? C2H2O4,CAS 號：2437-29-8］：純度 ≥98%。
4.4標準溶液配制
4. 1孔雀石綠標準儲備溶液:準確稱取標準品，用乙腈稀釋配制成100 μg/mL的標準儲備液,-18°C 避光保存,有效期3個月。
4. 2孔雀石綠標準中間溶液(1 μg/mL):吸取1. 00 mL孔雀石綠的標準儲備溶液至100 mL容量瓶, 用乙腈稀釋至刻度，-18°C避光保存。
4. 3孔雀石綠標準工作溶液:根據檢測需要移取一定體積的標準中間溶液，加入0.4 mL 0. 03 mol/L 硼氫化鉀溶液，用乙腈準確稀釋至2. 00 mL,配置適當濃度的標準工作溶液。標準工作溶液需現配現用。
4.5材料
4.5.1酸性氧化鋁:粒度為100目?200目(75μm?150 μm)。
4.5.2 MCX混合型陽離子交換柱：3 mL/60 mg。使用前，依次用3 mL乙腈、3 mL甲酸溶液預淋洗。
4.5.3微孔濾膜：0. 22 μm，通用型。
5儀器和設備
5.1高效液相色譜儀:配熒光檢測器。
5.2電子天平:感量0. 000 1 g,感量0. 01 go
5.3渦旋振蕩器。
5.4超聲波清洗器:頻率40 kHz。
5. 5 離心機：多3 000 r/min。
5.6固相萃取裝置：12孔或24孔。
5.7 pH 計。
5.8可控溫氮吹濃縮儀。
5.9 注射器：50 mL 或 100 mL。
文章來源：《水產品獸藥殘留限量及監測方法查詢手冊》
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