土壤脫氫酶測定方法

問：哪位大俠做過測定土壤脫氫酶活性的實驗，請指點迷津啊，先謝謝了。我在做標(biāo)準(zhǔn)曲線時，加入萃取劑（甲醇或丙酮）后，各管的上部出現(xiàn)沉淀，紅色溶液位于管的下部，上下顛倒搖勻后各管都變混濁。放置一段時間后各管都變澄清，但均為無色，如果不上下顛倒而只是振蕩最終也會都變成為色的澄清溶液，這是為什么啊？

1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

1.1配制不同濃度的TTC液：從1mg/mlTTC溶液分別吸取1，2，3，4，5，6，7ml, 分別放入50 ml的容瓶中，以蒸餾水定容至50 ml,各瓶中TTC濃度分別為20，40，60，80.，100，120，140ug/ml.

1.2每只帶塞離心管內(nèi)加入tris-鹽酸緩沖液（pH=8.4)2 ml+2 ml 蒸餾水+1 ml TTC液（從低濃度到高濃度依次加入）,對照管加入2ml tris-鹽酸緩沖液+3 ml 蒸餾水，不加TTC，所得每只離心管TTC含量分別為20，40，60，80.，100，120，140ug。

1.3 每管各加入連二亞硫酸鈉1 g，振蕩搖勻，使TTC還原，生成紅色的TPF。

1.4在各管中加入5 ml 甲醇，振蕩萃取3min，抽提TPF。

1.5取上清液于485 nm 波長下測吸光度值。

1.7繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

答：我曾經(jīng)做過脫氫酶活性的測定，基本步驟相同，不過最后使用甲苯提取的，做出來的標(biāo)準(zhǔn)曲線還不錯，不過出現(xiàn)像上面的無色現(xiàn)象，出現(xiàn)無色會不會是由于萃取劑的問題呢。

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