如何將脂類從蛋白中去除
問：抽提細(xì)胞總蛋白時(shí)，如何將脂類從蛋白中去除？如果目的蛋白可能是脂結(jié)合的膜蛋白。
答：作過脂閥研究的人都知道把脂類從細(xì)胞蛋白中分離出來非常困難。要用超級(jí)離心機(jī)，100,000轉(zhuǎn)以上離心幾個(gè)甚至十幾個(gè)小時(shí)，有點(diǎn)象提細(xì)胞膜蛋白的提取。還有一種分級(jí)提取的方法，也很煩瑣。到目前似乎還沒有簡單的方法祛除脂類。
答：膜蛋白一般都有疏水性的基團(tuán)，可以通過它的水溶性來去除脂質(zhì)物質(zhì)。為了提高疏水蛋白在水中的水溶性，通常可以添加一些尿素，非離子我、去污劑或兩性離子去污劑。這些物質(zhì)除了增加蛋白的水溶性之外，還可以從蛋白或亞基上去掉脂質(zhì)。尿素的溶解效應(yīng)是由于它可以破壞疏水鍵和離子鍵，而使蛋白部分去折疊。尿素的濃度取決于對溶解的要求和蛋白變性的影響，一般用4-8mol/L .含尿素的樣品，在凝膠中也要加相應(yīng)濃度的尿素。
有時(shí)尿素和tritonx-100或別的非離子去污劑一起使用更能改善結(jié)果。非離子去污劑能在不破壞蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，保持生物活性的的情況下改善蛋白的溶解度，但必須選擇合適的濃度，過低的濃度不能改善蛋白的溶解性，過高會(huì)使蛋白帶變寬，影響分辨率和引起紋理現(xiàn)象。甘氨酸是兩性離子，可以通過它的偶極矩作用來增加蛋白的可溶性。一般是用1%的濃度。此外有些蛋白提取試劑盒中加的去氧膽酸鈉似乎也是去除脂質(zhì)的。因?yàn)槲覀兌贾滥懼峥梢栽黾又|(zhì)的水溶性，從而去除脂質(zhì)在電泳過程中的干擾。蛋白提取完后把裂解液高速離心下，也有助于去除一些膜物質(zhì)。上樣前離心一下，也是很有好處的。
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