病毒離心純化方法
問：哪位大俠做過病毒純化，可以提供一個(gè)病毒立離心純化的詳細(xì)protocol嗎？拜托了，先謝謝大家了！
答：病毒提純有很多方法的 ，可以用理化方法濃縮，吸附法，超速離心法等。我以前用PEG沉淀法，比較簡單。
1、用超聲波或凍融的方法使細(xì)胞破碎釋放出病毒；
2、慢慢攪動(dòng)并加入NaCl終濃度是0.5mol/L,有助于病毒的沉淀，再等量加入10％PEG；
3、4度過夜或放置一段時(shí)間；
4、8000/min離心30分鐘，收集病毒沉淀；
5、將病毒沉淀加入適量的pbs中，4度過夜；
6、10000/min離心1小時(shí)。
還可以用梯度離心或其他方法進(jìn)一步純化。
問：您的方法對(duì)我現(xiàn)在太有幫助有了，謝謝。但有幾個(gè)地方不是很清楚，可以向你請(qǐng)教碼？
1、我的是雞胚鳥囊液，病毒效價(jià)為1：640，只有6ml左右，效果怎樣？
2、第二步加等量10％PEG是什么意思？您用的PEG的分子量是多大的？10％是PEG溶液的濃度嗎？
3、最后 一步離心后還是收集沉淀嗎？
答：一般使用的是PEG6000就可以了。如果對(duì)樣品的純度不是嚴(yán)格要求的話，可以建議使用Millpore 公司的 離心濃縮柱，Amicon 系列的可以一次濃縮15ml樣品。記得有一篇關(guān)于PEG方法沉淀 HAV的文獻(xiàn)，你可以去下載看看參考。10％PEG是，應(yīng)該是終濃度。離心后要的是沉淀，即濃縮的病毒。
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