熒光分光光度計(jì)法測(cè)定硫酸奎寧濃度的實(shí)驗(yàn)方法與步驟
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熒光分析法具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、試樣量少的特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)的主要目的是通過學(xué)習(xí)熒光法測(cè)定硫酸奎寧，掌握VARIAN熒光分光光度計(jì) 的使用方法以及利用熒光法進(jìn)行定量分析。
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1.熟悉VARIAN熒光分光光度計(jì) 的原理和使用
2.掌握激發(fā)光譜和發(fā)射光譜的概念及測(cè)定方法
3.掌握用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行熒光定量分析
VARIAN熒光分光光度儀
熒光分光光度計(jì) 基本流程如圖：
光譜掃描的實(shí)現(xiàn):
儀器有兩套光柵分光系統(tǒng)，根據(jù)激發(fā)和發(fā)射光柵動(dòng)的形式可形成兩種光譜：
激發(fā)光譜：激發(fā)光柵轉(zhuǎn)動(dòng)
發(fā)射光譜：發(fā)射光柵轉(zhuǎn)動(dòng)
熒光物質(zhì)的激發(fā)光譜
固定發(fā)射光波長(zhǎng).以不同波長(zhǎng)的入射光激發(fā)熒光物質(zhì),化合物發(fā)射的熒光強(qiáng)度F與入射光波長(zhǎng)的關(guān)系曲線λ
2.發(fā)射光譜 (或熒光光譜 )
固定激發(fā)光波長(zhǎng). 化合物發(fā)射的熒光中各種波長(zhǎng)組分的熒光強(qiáng)度.
二、實(shí)驗(yàn)原理
1.硫酸奎寧的分子 結(jié)構(gòu)特征
硫酸奎寧屬生物堿類抗心率失常藥,其分子 具有喹啉環(huán)結(jié)構(gòu),可產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光,可直接用熒光法測(cè)定其熒光強(qiáng)度,由校正曲線求出回歸方程進(jìn)而求出試樣中奎寧的濃度.
2.定量依據(jù)與方法
(1)定量依據(jù)：
在低濃度時(shí),溶液的熒光強(qiáng)度與溶液中熒光物質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系
If = Kc
(2)定量方法:校正曲線法
標(biāo)準(zhǔn)曲線法：
配制一系列標(biāo)準(zhǔn)濃度試樣測(cè)定熒光強(qiáng)度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再在相同條件下測(cè)量未知試樣的熒光強(qiáng)度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度;
三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
?1.儀器和試劑:
儀器:熒光分光光度計(jì),刻度吸管,容量瓶
試劑:0.1μg/ml硫酸奎寧(儀器室),
100μg/ml硫酸奎寧標(biāo)準(zhǔn)溶液,
硫酸奎寧待測(cè)液
0.05mol/l稀硫酸溶液
?2.實(shí)驗(yàn)步驟:
1.標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備:
精密吸取硫酸奎寧標(biāo)液(100μg/ml,0.05 mol/L硫酸溶解)1.0、2.0、3.0、4.0及5.0ml分別置于50ml容量瓶中,用0.05mol/L硫酸稀釋至刻線,搖勻,制得對(duì)照品的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液,并計(jì)算濃度.
2.待測(cè)試樣溶液的制備:
吸取硫酸奎寧待測(cè)液1.0ml,于50ml容量瓶中,用0.05mol/L硫酸稀釋至刻線,搖勻,得待測(cè)試樣溶液.
3.測(cè)定:
(1)用0.1ug/ml的硫酸奎寧測(cè)定激發(fā)光譜和發(fā)射光譜:
開機(jī)—打開光譜掃描工作站--方法建立—調(diào)零--激發(fā)光譜的測(cè)定—發(fā)射光譜的測(cè)定—打印結(jié)果
(2)校正曲線法測(cè)定試樣溶液的濃度:
打開濃度測(cè)定工作站--方法建立--校正曲線的測(cè)定--試樣溶液的測(cè)定—打印結(jié)果--關(guān)機(jī)
注意事項(xiàng)：溶液配制過程中需應(yīng)當(dāng)規(guī)范操作各種容量?jī)x器，防止誤差；樣品測(cè)定時(shí)，應(yīng)該按照從低濃度到濃度的順序，盡可能的減少測(cè)量誤差；儀器校正后制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的參數(shù)應(yīng)該和測(cè)定樣品時(shí)保持一致
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