甲醛滴定法測(cè)定氨基酸含量
一、目的
初步掌握甲醛滴定法測(cè)定氨基酸含量的原理和操作要點(diǎn)
二、原理
水溶液中的氨基酸為兼性離子，因而不能直接用堿滴定氨基酸的羧基。甲醛可與氨基酸上的—N+H3結(jié)合，形成—NH—CH 2 OH、—N(CH 2 —OH) 2 等羥甲基衍生物，使N+H3上的H+游離出來(lái)，這樣就可以用堿滴定N+H3放出H + ，測(cè)出氨基氮，從而計(jì)算氨基酸的含量。
若樣品中只含有單一的已知氨基酸，則可由此法滴定的結(jié)果算出氨基酸的含量。
若樣品中含有多種氨基酸（如蛋白質(zhì)水解液），測(cè)不能由此法算出氨基酸的含量。
脯氨酸與甲醛作用后，生成的化合物不穩(wěn)定，導(dǎo)致滴定后結(jié)果偏低；酪氨酸含酚基結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致滴定結(jié)果偏高。
三、材料、 試劑 與器具
（一） 試劑
1、0.5%酚酞酒精溶液
稱0.5g酚酞溶于100ml60%酒精中。
2、0.05%溴麝香草酚藍(lán)溶液
取0.05溴麝行草酚藍(lán)溶于100ml 20%乙醇溶液中。
3、1%甘氨酸溶液
取1g甘氨酸溶于100ml 蒸餾 水。
4、標(biāo)準(zhǔn)0.100mol/L 氫氧化鈉溶液
5、中性甲本醛溶液
取甲醛溶液50ml，加0.5%酚酞指示劑約3ml，滴加0.1mol/LnaOH溶液，使溶液呈微粉紅色，臨用前中和。
（二）實(shí)驗(yàn)器具
1、錐形瓶
2、堿式滴定管
3、 移液管洗耳球
4、天平
5、容量瓶
6、試劑瓶
7、量筒
8、玻棒與燒杯
四、操作步驟
1、取3只100ml錐形瓶，按下表加入試劑。
2、混勻后用標(biāo)準(zhǔn)0.100mol/L氫氧化鈉溶液滴定至紫色（pH8.7~9.0）
3、結(jié)果計(jì)算
每毫升 氨基酸 溶液中含氨基氮的毫克數(shù)為
五、注意事項(xiàng)
利用甲醛滴淀法可以用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)的水解程度。隨著蛋白質(zhì)水解度的增加，滴定值也增加，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)水解完成后，滴定值不再增加。
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