氨基酸的分離鑒定——紙層析法（paper chromatography）
【實驗目的】
1.學習氨基酸紙層析法的基本原理
2.掌握氨基酸紙層析的操作技術(shù)
【實驗原理】
紙層析法（paper chromatography）是生物化學上分離、鑒定氨基酸混合物的常用技術(shù)，可用于蛋白質(zhì)的氨基酸成分的定性鑒定和定量測定；也是定性或定量測定多肽、核酸堿基、糖、有機酸、維生素、抗菌素等物質(zhì)的一種分離分析工具。紙層析法是用濾紙作為惰性支持物的分配層析法，其中濾紙纖維素上吸附的水是固定相，展層用的有機溶溶劑是流動相。在層析時，將樣品點在距濾紙一端約2～3cm的某一處，該點稱為原點；然后在密閉容器中層析溶劑沿濾紙的一個方向進行展層，這樣混合氨基酸在兩相中不斷分配，由于分配系數(shù)（Kd）不同，結(jié)果它們分布在濾紙的不同位置上。物質(zhì)被分離后在紙層析圖譜上的位置可用比移值（rate of flow, Rf）來表示。所謂Rf，是指在紙層析中，從原點至氨基酸停留點（又稱為層析點）中心的距離（X）與原點至溶劑前沿的距離（Y）的比值：
在一定條件下某種物質(zhì)的Rf值是常數(shù)。Rf值的大小與物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、溶劑系統(tǒng)、溫度、濕度、層析濾紙的型號和質(zhì)量等因素有關(guān)。
【器材與 試劑 】
（一）器材
1.層析缸
2.點樣毛細管
3.小燒杯
4.培養(yǎng)皿
5.量筒
6.噴霧器
7.吹風機（或烘箱）
8.層析濾紙（新華一號）
9.直尺及鉛筆
(二) 試劑
1. 擴展劑(水飽和的正丁醇和乙酸混合液)
將正丁醇和乙酸以體積比4∶1在分液漏斗中進行混合，所得混合液再按體積比5∶3與蒸餾水混合；充分振蕩，靜置后分層，放出下層水層，漏斗內(nèi)即為擴展劑。
2. 氨基酸溶液
0.5%賴氨酸、脯氨酸、亮氨酸以及它們的混合液（各組份均為0.5%）。
3. 顯色劑
0.1%水合茚三酮正丁醇溶液。
【實驗步驟】
1.準備濾紙
取層析濾紙（長22㎝、寬14㎝）一張，在紙的一端距邊緣2～3㎝處用鉛筆劃一條直線，在此直線上每間隔3㎝作一記號，如右圖所示。
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