酶的性質(zhì)實驗—酶的特異性
【實驗原理】
酶的特異性是指酶對它所催化的反應以及底物結構有嚴格選擇性，一種酶只對一種物質(zhì)或一類結構相似的物質(zhì)起作用。酶比一般催化劑特異性強，因酶是一種蛋白質(zhì)，結構復雜，在其精細的空間構象中，存在一個特殊部分“活性部位”，能專一地與對應的底物結合，體現(xiàn)酶的特異性。
本實驗以蛋白酶和淀粉酶對相應底物蛋白質(zhì)及淀粉的作用為例。來觀察酶的特異性，實驗結果的檢查根據(jù)酪蛋白水解生成酪氨酸，酪氨酸與福林試劑 呈藍色反應，淀粉能與碘起藍色或蘭紫色反映來確定。
【實驗材料】
1. 實驗器材
試管及試管架；移液管；燒杯；恒溫水浴鍋； 溫度計
2. 實驗 試劑
⑴ 1% 淀粉溶液：將1g淀粉溶解于100ml蒸餾水中。
⑵ 1%酪蛋白溶液: 稱取酪蛋白1克于研缽中，先用少量蒸餾水濕潤后，慢慢加入 0.2mol/L NaOH 4ml，充分研磨，用蒸餾水洗入100ml容量瓶中，放入水浴中煮沸15分鐘,溶解后冷卻，定容至100ml，保存于冰箱內(nèi)。
⑶ 1/2000堿性蛋白酶溶液: 精確稱取干酶粉2克，加入pH10硼砂氫氧化鈉緩沖溶液10ml，在小燒杯中溶解，并用玻璃棒攪拌，靜止片刻后，將上層液小心傾入容量瓶中，殘渣部分再加入少量緩沖液，如此反復攪拌溶解4次，最后全部移入200ml容量瓶中。用緩沖溶液定容至刻度，充分搖勻，用二層紗布或四層紗布過濾，吸取濾液5ml，移入100ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，所得液為稀釋2000倍的酶液。
⑷ pH10 硼砂氫氧化鈉緩沖液：
甲液（0.05moL/L硼砂溶液）：取硼砂(Na2B4O7·10H2O) 19克，用蒸餾水溶解并定容至1000ml 。
乙液：0.2moL/L氫氧化鈉溶液。
配制pH10硼砂-氫氧化鈉溶液：吸取甲液50ml，再加入乙液21ml，用蒸餾水定容至200ml。
⑸ 0.4 mol/L碳酸鈉溶液
(6) 0.4 mol/L三氯醋酸溶液
⑺ 福林試劑: 在1L容積的磨口回流瓶中加入50g鎢酸鈉(Na2W04·2H20)、125g鉬酸鈉(Na2Mo04;2H20)、350ml蒸餾水、25ml 85％磷酸及50ml濃鹽酸，充分混勻后回流10h。回流完畢，再加25g硫酸鋰、25ml蒸餾水及數(shù)滴液體溴，開口繼續(xù)沸騰15分鐘，以便驅(qū)除過量的溴，冷卻后定容到500ml，過濾，置于棕色瓶中暗處保存。使用前加4倍蒸餾水稀釋。
⑻ 1/2000淀粉酶溶液：用蒸餾水作稀釋溶劑，配制方法同堿性蛋白酶液相同。
⑼ 碘-碘化鉀溶液: 稱取碘10克，碘化鉀20克，同溶于100m1蒸餾水中，貯于棕色瓶內(nèi)。使用前稀釋10倍。
【實驗操作】
1.取五支 試管 , 編號，按下表加入試劑：
試劑 | 試管 編號 | ||||
對照 | 1 | 2 | 3 | 4 | |
1% 酪蛋白溶液(ml) | 1.0 | 1.0 | 1.0 | ||
pH10 緩沖液(ml) | 1.0 | ||||
蒸餾水 (ml) | 2.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | |
1% 淀粉溶液(ml) | 1.0 | 1.0 | |||
1/2000堿性蛋白酶溶液(ml) | 1.0 | 1.0 | |||
1/2000淀粉酶溶液(ml) | 1.0 | 1.0 | |||
2．將各管充分搖勻后，于40℃ 水浴 中保溫15分鐘。
3．于3、4號管中各加碘溶液2滴，觀察實驗現(xiàn)象，做好記錄。
4．于對照管及1、2號管各加入3.0mL 0.4M 三氯醋酸溶液，搖勻，分別過濾，各吸取濾液1.0ml，加0.4M碳酸鈉溶液5.0ml，福林試劑1.0ml，搖勻，于40℃ 水浴 保溫15分鐘。取出后觀察三管的現(xiàn)象，并記錄。
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