一、實(shí)驗(yàn)原理

平板菌落計(jì)數(shù)法是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的一個(gè)菌落是由一個(gè)單細(xì)胞繁殖而成的現(xiàn)象進(jìn)行的，也就是說(shuō)一個(gè)菌落即代表一個(gè)單細(xì)胞。 

計(jì)數(shù)時(shí)，先將待測(cè)樣品作一系列稀釋，再取一定量的稀釋菌液接種到培養(yǎng)皿中，使其均勻分布于平皿中的培養(yǎng)基內(nèi)，經(jīng)培養(yǎng)后，由單個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖形成菌落，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目，即可換算出樣品中的含菌數(shù)。 

此法優(yōu)點(diǎn)是能測(cè)出樣品中的活菌數(shù)，但手續(xù)繁瑣，測(cè)定值常受各種因素影響。

二、實(shí)驗(yàn)器材

待測(cè)菌液、培養(yǎng)基、涂布器、無(wú)菌水、酒精燈等。

三、實(shí)驗(yàn)步驟

1、 制備培養(yǎng)基

（1） 根據(jù)培養(yǎng)不同細(xì)菌選擇不同培養(yǎng)基，高溫滅菌后冷卻至 50 ℃左右倒入無(wú)菌培養(yǎng)皿中，充分冷卻待平板稍干后才可使用。 

（2）每一平板傾倒約 15mL 培養(yǎng)基，培養(yǎng)基應(yīng)厚薄均勻，平板表面應(yīng)光滑。 

倒平板方法：右手持盛培養(yǎng)基的錐形瓶置火焰旁邊，瓶口保持對(duì)著火焰；左手拿無(wú)菌培養(yǎng)皿并將皿蓋在火焰附近打開(kāi)一縫，迅速倒入培養(yǎng)基約 15 mL，加蓋后輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均勻分布在培養(yǎng)皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即為平板。

2、 樣品稀釋液的制備

（1）吸取原菌液到裝有 90 mL 無(wú)菌水并放有小玻璃珠的 250 mL 三角瓶中，用手或置搖床上振蕩，使微生物細(xì)胞分散，靜置 20–30 s，即成 10?1 稀釋液； 

（2） 再用 1 mL 無(wú)菌吸管，吸取 1 mL 10?1 稀釋液，移入裝有 9 mL 無(wú)菌水的試管中，吹吸 3 次，讓菌液混合均勻，即成 10?2 稀釋液； 

（3） 以此類推，連續(xù)稀釋，制成 10?3、10??、10??、10??、10??、10?? 等一系列稀釋菌液。 

注意：

精確吸取 0.1 mL 10??、10??、10?? 稀釋菌液，放入對(duì)應(yīng)的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，進(jìn)行涂布。 

4、 恒溫培養(yǎng)

將平板倒置，于適溫下培養(yǎng)，一般細(xì)菌培養(yǎng) 48 h 后，對(duì)菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)。

5、 計(jì)數(shù)規(guī)則

（1） 可用肉眼觀察，必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量； 

（2）  選取菌落數(shù)在 30–300 CFU 之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)； 

（3）  低于 30 CFU 的平板記錄具體菌落數(shù)，大于 300 CFU 的可記錄為“多不可計(jì)”； 

（4）  每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的平均數(shù)。