水產品中喹烯酮殘留量的測定——高效液相色譜法（一）
1 范圍
本標準規定了水產品中喹烯酮殘留量測定的高效液相色譜法。
本標準適用于水產品中喹烯酮殘留量的測定。
2 規范性引用文件
下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據本標準達成協議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。
GB/T 6682 分析實驗室用水規格和試驗方法
SC/T 3016 水產品抽樣方法
3 原理
以乙酸乙酯提取樣品中殘留的喹烯酮，旋轉蒸發濃縮，流動相溶解，正己烷脫脂，用液相色譜儀-紫外檢測法檢測，外標法定量。
4 試劑
本標準所用試劑除標明外，其他均為分析純或更高純度。
4.1 水：符合GB/T 6682 一級純水的要求。
4.2 乙酸乙酯。
4.3 正己烷。
4.4 乙腈：色譜純。
4.5 喹烯酮標準品：純度≥99.0%。
4.6 喹烯酮標準儲備液：準確稱取標準品10mg，加少量乙腈溶解，用乙腈定容至100mL棕色容量瓶中，保存于2°C~8°C冰箱中（保存期不超過1個月）。該喹烯酮標準儲備溶液濃度為100μg/mL。
4.7 喹烯酮系列標準工作液：用乙腈將標準儲備液稀釋至10μg/mL作為標準中間液，準確量取喹烯酮標準中間液，用流動相稀釋成0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL系列標準工作液，現配現用。
5 儀器和設備
5.1 液相色譜儀，具紫外檢測器。
5.2 高速勻漿機。
5.3 旋轉蒸發儀。
5.4 分析天平，感量0.0001g。
5.5 天平，感量0.01g。
5.6 離心機：5 000r/min。
5.7 離心機：14 000r/min。
5.8 渦旋混合器。
5.9 具塞離心管：50mL。
5.10 離心管：2.5mL。
5.11 雞心瓶：100mL。
6 試樣制備
6.1 樣品預處理
水產品取可食肌肉部分，樣品切成小塊后混勻，均質成肉糜，置于0°C?4°C 冰箱中備用，若不能及時檢測時，放置一18°C冰箱中儲存備用。
6.2 提取
準確稱取試樣(5+0.02)g肉糜樣品于50mL具塞玻璃離心管中，加入8mL水，勻漿30s，加入乙酸乙酯15mL，渦旋混合3min，4500r/min離心5min，取上清液于100mL雞心瓶中。
另取一50mL離心管加入15mL乙酸乙酯，清洗勻漿機刀頭，清洗液移入前一離心管中，用玻璃棒搗散離心管中的沉淀，渦旋混合3min，4500r/min離心5min，上清液并入100mL雞心瓶中。在50mL離心管中繼續加入15mL乙酸乙酯，重復上述操作一次。合并3次提取液備用。
6.3 凈化
備用液于40°C水浴旋轉蒸發至干，加1.0mL流動相溶解，再加入1mL正己烷，渦旋混合1min，轉入2.5mL離心管中，10000r/min離心5min，棄去正己烷層，上清液經0.45μm有機微孔濾膜過濾后供液相色譜分析。
6.4 色譜條件
6.4.1 色譜柱：苯基柱，250mmX4.6mm，5μm，或性能相當者。
6.4.2 流動相：乙腈+水=50+50(V+V)。
6.4.3 流速：1.0mL/min
6.4.4 柱溫：30°C
6.4.5 檢測器波長：312nm
6.4.6 進樣量：20 μL
6.5 樣品測定
將20μL喹烯酮系列標準工作液及樣品液分別注入液相色譜儀中，按上述色譜條件進行色譜分析，記錄峰面積，響應值均應在儀器檢測的線性范圍之內。根據標準樣品的保留時間定性，外標法定量。喹烯酮液相色譜圖見附錄A。
6.6 空白對照試驗
除不加試樣外，均按上述測定步驟進行。
文章來源：《水產品獸藥殘留限量及監測方法查詢手冊》
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