水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測(cè)定——液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（一）
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中孔雀石綠及其代謝物隱色孔雀石綠(leucomalachite green)、結(jié)晶紫及其代謝物隱色結(jié)晶紫(leucocrystal violet)殘留量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和高效液相色譜的測(cè)定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于鮮活水產(chǎn)品及其制品中孔雀石綠及其代謝物隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫及其代謝物隱色結(jié) 晶紫殘留量的檢驗(yàn)。
2 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法
2. 1 原理
試樣中的殘留物用乙月青-乙酸鉉緩沖溶液提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲烷層，經(jīng)中性氧 化鋁和陽(yáng)離子固相柱凈化后用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定，內(nèi)標(biāo)法定量。
2.2 試劑和材料
除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為重蒸餾水。
2.2. 1 乙腈：液相色譜純。
2.2.2 甲醇：液相色譜純。
2.2.3 二氯甲烷。
2.2.4 無(wú)水乙酸銨。
2.2.5 5 mol/L乙酸銨緩沖溶液：稱取38. 5 g無(wú)水乙酸銨溶解于90 mL水中，冰乙酸調(diào)pH到7. 0，用 水定容至100 mL。
2.2.6 0.1 mol/L乙酸銨緩沖溶液：稱取7.71 g無(wú)水乙酸銨溶解于1 000 mL水中，冰乙酸調(diào)pH到 4.5。
2.2.7 5 mmol/L乙酸銨緩沖溶液：稱取0. 385 g無(wú)水乙酸銨溶解于1 000 mL水中，冰乙酸調(diào)pH到 4. 5，過(guò) 0. 2 μm 濾膜。
2.2.8 冰乙酸。
2. 2. 9 0. 25 g/mL鹽酸羥胺溶液。
2.2.10 1. 0 mol/L對(duì)-甲苯磺酸溶液：稱取17.2 gM-甲苯磺酸，用水溶解并定容至100 mL。
2.2. 11 體積分?jǐn)?shù)為2%的甲酸溶液。
2. 2. 12 體積分?jǐn)?shù)為5%的乙酸銨甲醇溶液：量取5 mL乙酸銨緩沖溶液(2. 2. 5)用甲醇定容至100 mL。
2.2.13 陽(yáng)離子交換柱：MCX，60 mg/3 mL，使用前依次用3 mL乙腈、3 mL甲酸溶液(2. 2. 11) 活化。
2. 2.14 中性氧化鋁柱：1 g/3 mL，使用前用5 mL乙腈活化。
2.2.15 標(biāo)準(zhǔn)品：孔雀石綠(MG)、隱色孔雀石綠(LMG)、結(jié)晶紫(CV)、隱色結(jié)晶紫(LCV)、同位素內(nèi)標(biāo)氘代孔雀石綠(Ds-MG)、同位素內(nèi)標(biāo)氘代隱色孔雀石綠(D6-LMG)，純度大于98%。
2.2.16 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：準(zhǔn)確稱取適量的孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫、氘代孔雀石綠、 氘代隱色孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈分別配制成100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。
2.2.17 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1 μg/mL)：分別準(zhǔn)確吸取1.00 mL孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(2. 2. 16)至100 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，1 mL該溶液分別含1μg的孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫。一18°C避光保存。
2.2.18 混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(100 ng/mL):用乙腈稀釋混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(2. 2.17)，配制成每毫升含孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫均為100 ng的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。一18°C避光保存。
2.2.19 混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液：用乙睛稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液(2. 2.16)，配制成每毫升含氘代孔雀石綠和氘代隱色孔雀石綠各100 ng的內(nèi)標(biāo)混合溶液。一18°C避光保存。
2.2.20 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：根據(jù)需要，臨用時(shí)吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(2. 2.18)和混合內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液(2. 2.19)，用乙腈+ 5 mmol/L乙酸鉉溶液(1 + 1)稀釋配制適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，每毫升該混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液含有氘代孔雀石綠和氘代隱色孔雀石綠各2 ng。
2.3 儀器和設(shè)備
2.3.1 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀:配有電噴霧(ESI)離子源
2.3.2 勻漿機(jī)
2. 3. 3 離心機(jī)：4 000 r/min
2.3.4 超聲波水浴
2.3.5 渦旋振蕩器
2.3.6 KD 濃縮瓶：25 mL
2.3.7 固相萃取裝置
2.3.8 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀
文章來(lái)源：《水產(chǎn)品獸藥殘留限量及監(jiān)測(cè)方法查詢手冊(cè)》
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