漁用藥物代謝動(dòng)力學(xué)和殘留試驗(yàn)技術(shù)規(guī)范（二）
4樣品分析方法確證技術(shù)要求
4. 1特異性
對(duì)于色譜法，至少要考察6個(gè)不同個(gè)體來(lái)源的空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對(duì)照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品色譜圖，反映分析方法的特異性。對(duì)于質(zhì)譜法，則應(yīng)著重考察分析過(guò)程 中的介質(zhì)效應(yīng)。
4. 2標(biāo)準(zhǔn)曲線和定量范圍
根據(jù)所測(cè)定物質(zhì)的濃度與響應(yīng)的相關(guān)性，用回歸分析方法獲得標(biāo)準(zhǔn)曲線,提供標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程和 相關(guān)系數(shù)。標(biāo)準(zhǔn)曲線高低濃度范圍為定量范圍，必須用至少6個(gè)濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，應(yīng)使用與待測(cè)樣品相 同的生物介質(zhì)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，定量范圍要能覆蓋全部待測(cè)樣品濃度。建立標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，應(yīng)隨行空白生物樣品，但計(jì)算時(shí)不包括該點(diǎn)。
4.3精密度與準(zhǔn)確度
一般要求選擇3個(gè)?5個(gè)濃度樣品同時(shí)進(jìn)行方法的精密度和準(zhǔn)確度考察。低濃度選擇在定量限附近，其濃度在定量限的3倍以?xún)?nèi);高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限；中間選一個(gè)濃度。每一濃度每批至少測(cè) 定5個(gè)樣品，為獲得批間精密度應(yīng)至少連續(xù)測(cè)定3個(gè)分析批。精密度用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）表示，RSD一般應(yīng)小于15%,在最低檢測(cè)限附近RSD應(yīng)小于20%。準(zhǔn)確度一般應(yīng)在85%? 115%范圍內(nèi)，在最低檢測(cè)限附近應(yīng)在80%?120%范圍內(nèi)。
4.4最低檢測(cè)限
一般要求殘留分析方法的最低檢測(cè)限（LOD）滿(mǎn)足:MRL>0. 5 mg/kg時(shí),最低檢測(cè)限為0.1 mg/kg；當(dāng) MRL 在 0. 5 mg/ kg~O. 05 mg/kg 時(shí),最低檢測(cè)限為 0.1 mg/ kg?0. 02 mg/ kg；當(dāng) MRL<0. 05 mg/ kg 時(shí)，最低檢測(cè)限為0.5 MRL。
4.5回收率
一般要求考查高、中、低3個(gè)濃度的提取回收率，其結(jié)果可重現(xiàn)。
4.6方法學(xué)質(zhì)控
對(duì)于未知濃度樣品的測(cè)定應(yīng)在生物樣品分析方法確證完成以后開(kāi)始。每個(gè)未知濃度樣品一般 測(cè)定一次，必要時(shí)可進(jìn)行復(fù)測(cè)。每個(gè)分析批生物樣品測(cè)定時(shí)應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測(cè)定高、 中、低3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品。質(zhì)控樣品測(cè)定結(jié)果的偏差一般小于20%，每個(gè)濃度質(zhì)控樣品至少雙樣本，并應(yīng)均勻分布在未知樣品測(cè)試順序中。當(dāng)一個(gè)分析批中未知濃度樣品數(shù)目較多時(shí)，應(yīng)增加各濃度質(zhì)控樣品數(shù)，使質(zhì)控樣品數(shù)大于未知濃度樣品總數(shù)的5%,質(zhì)控樣品測(cè)定的偏差一般應(yīng)小于15%, 低濃度點(diǎn)偏差一般應(yīng)小于20%,最多允許1/3不在同一濃度的質(zhì)控樣品結(jié)果超限。如質(zhì)控樣品測(cè) 定結(jié)果不符合上述要求，則該分析批樣品測(cè)試結(jié)果作廢。濃度高于定量上限的樣品，應(yīng)采用相應(yīng)的 空白介質(zhì)稀釋后重新測(cè)定。整個(gè)分析過(guò)程應(yīng)當(dāng)遵從預(yù)先制定的試驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序以及良好實(shí)驗(yàn)室操作原則。
4. 7微生物學(xué)和免疫學(xué)分析方法確證技術(shù)要求
上述分析方法確證的很多指標(biāo)和原則也適用于微生物學(xué)或免疫學(xué)分析，但在方法確證中應(yīng)考慮到它們的一些特殊之處。微生物學(xué)或免疫學(xué)分析的標(biāo)準(zhǔn)曲線本質(zhì)上是非線性的,所以應(yīng)采用比化學(xué)分析更多的濃度點(diǎn)來(lái)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5藥物代謝動(dòng)力學(xué)曲線的擬合、模型的確定及參數(shù)估算
5.1藥時(shí)曲線的擬合及模型確定
根據(jù)藥物性質(zhì)和動(dòng)物特點(diǎn)選擇合適的數(shù)據(jù)處理軟件,可采用Win Nonlin、Kinetica、3p87 (3p97)、PK- BP-N1、BAPP、MCPKP、DNS等;注明軟件名稱(chēng)、版本和來(lái)源。根據(jù)不同時(shí)間點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的血液等組織樣品 藥物濃度,作藥時(shí)曲線圖，釆用最小二乘法擬合出藥物代謝動(dòng)力學(xué)方程，根據(jù)血藥濃度與時(shí)間的函數(shù)關(guān)系 確定所屬的模型。
5.2藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)的估算
根據(jù)試驗(yàn)中測(cè)得的受試動(dòng)物的血藥濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，求得受試藥物的主要代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)。對(duì)于靜脈 注射給藥的藥物，應(yīng)提供消除半衰期t1/2、表觀分布容積Vd、血藥濃度-時(shí)間曲線下面積AUC、清除率CL 等參數(shù)值;對(duì)于血管外給藥的藥物，除提供上述參數(shù)外，還應(yīng)提供峰濃度Cmax、達(dá)峰時(shí)間Tmax等參數(shù)值。
文章來(lái)源：《水產(chǎn)品獸藥殘留限量及監(jiān)測(cè)方法查詢(xún)手冊(cè)》
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