Tricine-SDS-PAGE膠的使用方法
Tricine膠比較容易將樣品壓平，具體原因我也沒有搞清楚，但可以肯定的是這種膠跑出來的Marker又細又直，同樣，顯出來的條帶也壓的很好。與普通的SDS-PAGE膠跑出來的結果相比，Marker擴散沒有那么厲害，各泳道條帶間隔明顯，不像普通膠的條帶容易連到一起。反正跑出來的條帶就是很漂亮。
Tricine-SDS-PAGE膠的配方：（我一直用的就是10%這個濃度，把8KD和280KD都做出來了）
分離膠 積層膠
ddH2O 1.85 mL 2 mL
AB-3 1 mL 250 uL
Gel-Buffer(3*) 1.65 mL 750 uL
甘油 0.5 mL —
10%AP 25 uL 22.5 uL
TEMED 2.5 uL 2.25 uL
(這個配方來自DXY，今天又回來了，呵呵)
3*Gel-Buffer 配方：(200mL量)
Tris-Base 48.44g
Tris-HCl 31.52g
SDS 0.6 g
pH 8.45,很難溶，可以60°C水浴促進溶解。
AB-3 (100mL量)
丙烯 48g
雙叉丙烯酰胺 1.5g
注意：丙烯溶解后會使溶液體積增大，故只要用約80mL水溶解即可，完全溶解后再定容。通風櫥內操作，注意保護自己！
外槽電泳液（+極）（Anode Buffer）10*
Tris-Base 46.92g
Tris-HCl 17.73g
500mL體積，pH 8.9。
內槽電泳液（-極）（Cathode Buffer）10*
Tris-Base 24.22g
Tricine 35.84g
SDS 2g
200mL體積，pH 約8.25。
（內外槽電泳液的體積這樣配，是因為一般電泳槽內槽一次只要150mL液體，而外槽需要400-500mL液體。）
制膠時，分離膠做好后加水壓平，一般20min就凝固了。為了避免樣品漏的問題，可在分離膠凝固后（表現為分層處出現一條清晰的分界線），這時候，可以不急著把水控干，而是配置積層膠，但是AP和TEMED先不加，再空出水（槍頭沿一邊吸盡即可），再在積層膠里加入AP,TEMED，迅速混勻，先取少量膠液灌入板內，輕輕搖晃幾下，潤一遍，棄掉這些膠液，這時候盡量去干凈，動作要快。再正式灌滿膠液，插上梳齒。
跑電泳時，可以60V先壓約30min，可以看到溴酚藍變的又細又直，待進入分離膠，可以看到預染的Marker已經分離，就可以將電壓調至120V跑完。
轉膜與普通的都一樣，這里建議30V恒壓轉2小時(用于80KD以下的蛋白分子），如果有更大的蛋白280KD的mTor,可以再這2h后再加350mA 30min，效果很好，280KD以下90KD以上的都可以加350mA這一步，時間根據分子量來定。90KD加15min即可。
北京天優福康生物科技有限公司
服務熱線：400-860-6160
聯系電話/微信：13718308763
QQ:2136615612 3317607072
E-mail：Tianyoubzwz@163.com
