常用的轉染方法
轉染方法 | 原 理 | 應 用 | 特 點 |
二乙氨乙基(DEAE)-右旋糖酐法 | 帶正電的DEAE-葡聚糖(dextran) 與帶負電的核酸磷酸骨架相互作用形成復合物,通過細胞內吞作用進入細胞 | 瞬時轉染 | 相對簡便,結果可重復,但對細胞有一定的毒副作用,轉染時需去除血清 |
磷酸鈣法 | 磷酸鈣-DNA 復合物吸附于細胞膜,被細胞內吞穩定轉染, | 瞬時轉染 | |
陽離子脂質體法 | 帶正電的脂質體與帶負電的核酸磷酸骨架形成復合物,被細胞內吞 | 穩定轉染 瞬時轉染, | 適用于所有細胞,轉染效率高,重復性好,但轉染時需去除血清,轉染效果隨細胞類型變化大 |
非脂質體脂類法 | 內含多種脂質成分,與DNA 結合后轉運到細胞內 | 瞬時轉染穩定轉染 | 適用于所有細胞,包括許多原代培養細胞;轉染效率高,細胞毒性小,轉染時可以不去除血清 |
逆轉錄病毒介導法 | 通過感染宿主細胞將外源基因整合到染色體中 | 穩定轉染 | 可用于難轉染的細胞,如原代細胞、體內細胞等。但攜帶基因不能太大,操作復雜,耗時,需考慮安全因素。 |
腺病毒介導法 | 通過感染宿主細胞將外源基因整合到染色體中 | 瞬時轉染特定宿主細胞 | 可用于難轉染的細胞,需考慮安全因素 |
電穿孔法 | 高脈沖電壓破壞細胞膜電位,DNA 通過膜上形成的小孔導入 | 穩定轉染, 瞬時轉染 | ,適用于所有細胞,但細胞致死率高,DNA 和細胞用量大,需根據不同細胞類型優化實驗條件 |
基因槍法將 | DNA 用顯微重金屬顆粒沉淀,再將包被好的顆粒用彈道裝置射入細胞,DNA 在胞內逐步釋放、表達 | 瞬時轉染 | 可用于人的表皮細胞、成纖維細胞、淋巴細胞系及原代細胞 |
顯微注射法 | 通過顯微操作將DNA 直接注入靶細胞核穩定轉染, | 瞬時轉染 | 轉染細胞數有限,多用于基因工程改造或轉基因動物的胚胎細胞 |
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