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常用的轉染方法
發布日期:2022-12-01 09:50:45


常用的轉染方法


轉染方法

 

 

 

二乙氨乙基(DEAE)-右旋糖酐法

帶正電的DEAE-葡聚糖(dextran) 與帶負電的核酸磷酸骨架相互作用形成復合物,通過細胞內吞作用進入細胞

瞬時轉染

相對簡便,結果可重復,但對細胞有一定的毒副作用,轉染時需去除血清

磷酸鈣法

磷酸鈣-DNA 復合物吸附于細胞膜,被細胞內吞穩定轉染,

瞬時轉染

操作簡便,但重復性差,不適用于原代細胞及某些培養細胞

陽離子脂質體法

帶正電的脂質體與帶負電的核酸磷酸骨架形成復合物,被細胞內吞

穩定轉染

瞬時轉染,

適用于所有細胞,轉染效率高,重復性好,但轉染時需去除血清,轉染效果隨細胞類型變化大

非脂質體脂類法

內含多種脂質成分,與DNA 結合后轉運到細胞內

瞬時轉染穩定轉染

適用于所有細胞,包括許多原代培養細胞;轉染效率高,細胞毒性小,轉染時可以不去除血清

逆轉錄病毒介導法

通過感染宿主細胞將外源基因整合到染色體中

穩定轉染

可用于難轉染的細胞,如原代細胞、體內細胞等。但攜帶基因不能太大,操作復雜,耗時,需考慮安全因素。

腺病毒介導法

通過感染宿主細胞將外源基因整合到染色體中

瞬時轉染特定宿主細胞

可用于難轉染的細胞,需考慮安全因素

電穿孔法

高脈沖電壓破壞細胞膜電位,DNA 通過膜上形成的小孔導入

穩定轉染,

瞬時轉染

,適用于所有細胞,但細胞致死率高,DNA 和細胞用量大,需根據不同細胞類型優化實驗條件

基因槍法將

DNA 用顯微重金屬顆粒沉淀,再將包被好的顆粒用彈道裝置射入細胞,DNA 在胞內逐步釋放、表達

瞬時轉染

可用于人的表皮細胞、成纖維細胞、淋巴細胞系及原代細胞

顯微注射法

通過顯微操作將DNA 直接注入靶細胞核穩定轉染,

瞬時轉染

轉染細胞數有限,多用于基因工程改造或轉基因動物的胚胎細胞

 


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