總氮量的測定——微量凱氏（Mirco-Kjeldahl）定氮法
一、目的
1、學習微量凱氏定氮法的原理
2、掌握微量凱氏定氮法的操作技術，包括標準硫酸銨含量的測定，未知樣品的消化、蒸餾、滴定及其含氮量的計算等。
二、原理
凱氏定氮法常用于測定天然有機物（如蛋白質，核酸及氮基酸等）的含氮量。
天然的含氮有機物與濃硫酸共熱時，其中的碳、氫二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮則變成氨，并進一步與硫酸作用生成硫酸銨。此時程稱之為“消化”。
但是，這個反應進行得比較緩慢，通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應的沸點，并加入硫酸銅作為催化劑，以促進反應的進行。甘氨酸的消化過程可表示如下：
濃堿可使消化液中的硫酸銨分解，游離出氮，借水蒸汽將產生的氨蒸餾到一定量，一定濃度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨與溶液中的氫離子結合，生成銨離子，使溶液中氫離子濃度降低。然后用標準無機酸滴定，直至恢復溶液中原來氫離子濃度為止，最后根據所用標準酸的當量數（相當于待測物中氨的當量數）計算出待測物中的氮量。
滴定時用甲烯藍和甲基紅混合指示劑，其指示范圍為pH5.2~5.6，將NH4H2BO3的藍色滴至原來H 3 BO 3 的藍紫色即為終點。
本法適用范圍0.2~1.0毫克氮。相對誤差應小于2%。
三、材料、試劑與器具
（一）材料
人的血清或豬的血清
（二）試劑
1、濃硫酸（化學噸）
2、30%氫氧化鈉（分析純）溶液
3、0.9%NaCl溶液
4、硫酸鉀—硫酸銅混合物：硫酸鉀與硫酸銅（CuSO 4 、5H 2 O）以3：1（W/W）的配比混合研磨成粉末。
5、2%硼酸
6、混合指示劑的配制：
方法一：取50毫升0.1%甲烯藍無水醇溶液與200毫升0.1%甲基紅無水乙醇溶液混合配成，貯于棕色瓶備用，這種指示劑酸性時為紫色，堿性時為綠色，變色范圍窄且靈敏。
方法二：0.1%溴甲酚綠乙醇溶液10毫升與0.1%甲基紅乙醇溶液2毫升混和即成。
本指示劑的變色范圍為 紫紅色 灰色 綠色
7．0.0100M HCl
8. 硼酸一指示劑混合液：取100毫升2%硼酸溶液，滴加混合指示劑貯備液，搖勻后溶液呈現紫紅色即可。（約加1毫升左右混合指示劑）
9.標準硫酸銨溶液（0.3毫克氮/毫升）
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