核糖核酸酶A(RNase A)
RNA酶A是內(nèi)切核糖核酸酶 ，可特異地攻擊RNA上嘧啶殘基的3"端，切割與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵。反應(yīng)終產(chǎn)物是嘧啶3"磷酸及末端帶嘧啶3"磷酸的寡核苷酸(Davidson 1972)。無輔因子及二價陽離子存在時，RNA酶A的作用可被胎盤RNA酶抑制劑(B1ackburn et al.1977)或氧釩—核糖核苷復(fù)合物(Puskas et al.1982)所抑制。
用途
(1)從DNA-RNA或RNA—RNA雜合體中去除未雜合的RNA區(qū)。
(2)確定DNA或RNA中單堿基突變的位置(Myers et al.1985，Winter et al.1985)。 在此方法中，RNA-DNA或RNA-RNA雜合體上的單堿基錯配可被RNA酶A識別并切割。利用含SP5或T7噬菌體啟動子的質(zhì)粒，在體外合成與野生型DNA或RNA互補的32p標(biāo)記RNA探針，然后與待檢含單堿基置換的DNA或RNA退火， 所產(chǎn)生的單堿基錯配可用RNA酶A切割，通過凝膠電泳 分析切割產(chǎn)物的大小即可確定錯配的位置。在所有各種可能的單堿基錯配中，大約50%可用此法確定。
制備不含DNA酶的核糖核酸酶
將胰核糖核酸酶(RNaseA)溶解在0.01 moI/L醋酸鈉(pH5.2)中，使終濃度為10 mg/m[，加熱到100oC，15min，在室溫下緩慢冷卻。用0.1體積的1M的Tris-C1調(diào)整pH至7.4后，分裝小管保存在—20C備用。當(dāng)濃縮的溶液在中性pH條件下加熱到100C時，核糖核酸酶產(chǎn)生沉淀。
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