基本原理
將特異性抗原包被在固相載體上，形成固相抗原，加入待檢標本（含相應抗體），其中抗體與固相抗原形成抗原-抗體復合物，再加入酶標記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體，亦稱二抗），與上述抗原-抗體復合物結(jié)合。此時加入底物，復合物上的酶則催化底物而顯色。
試劑與設備
純化抗原。
酶標抗體（辣根過氧化物酶標記抗人免疫球蛋白）
底物 (鄰苯二胺OPD或四甲聯(lián)苯胺TM
底物緩沖液（Na2HPO4 0.184g +構椽酸0.047g + H2O10ml + H2O2 5ul）
PBS（見附錄）
pH9.6碳酸鹽緩沖液CBS（見附錄）
洗液（PBS +0.05%體積的Tween20）
稀釋液（100ml PBS + 1g牛血清血蛋白）
終止液（２mol/L H2SO4）
酶標板（聚苯乙烯板）
微量加樣器
吸水紙
封口膠帶
酶標儀
洗板機等。
實驗步驟
一 予試驗
（一）抗原包被的酶標板的制備
１. 以碳酸鹽緩沖液將抗原稀釋成適當濃度（參考：5ug/ml），加入酶標板（50ul/孔），以膠帶封口，于4℃過夜。
２. 棄抗原液，以雙蒸水沖洗3次，自然干燥后以膠帶封口。此為已知抗原包被的酶標板，備用。
（二）底物濃度的摸索
在底物緩沖液中加入不同量的底物（參考：5mg/10ml），加入酶標板中（50ul/孔），以膠帶封口，37℃避光保存2h，在沒有明顯變色的條件下選擇盡可能大的底物濃度。
（三）酶標抗體濃度的摸索
用稀釋液稀釋酶標抗體至適當倍數(shù)（參考：40~4000倍），加入已包被抗原的酶標板中（50ul/ 孔），封口后于37℃作用30min。以洗液連續(xù)沖洗5次，然后于吸水紙上拍干，加入已摸索好的底物封口后于37℃作用2h，在沒有變色的條件下選擇盡可能大的酶標抗體濃度。
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