親和層析
親和層析法是分離蛋白質酶等生物大分子的一種極為有效的方法。它在 蛋白質分離技術中占有特殊的地位。前面討論的各種分離方法是根據混合物 中蛋白質之間的物理性質和化學性質(如蛋白質的溶解度、電荷、分子大小 或疏水作用等)的差別來純化的。這些方法的主要缺點是具有相似性質的蛋 白質，由于性質差別微小而難于分離，而親和層析是根據某種蛋白蛋對于某 種配體的生物專一性。因此，如果能利用這種不同的生物專一性作為分離的 基礎，就會產生一種有效的純化蛋白質的方法。早在1910 年，就有人發現 淀粉能吸附淀粉水解酶，在1951 年，有人以“免疫吸附劑”的形式來分離 抗體；1967 年，Werle 等人開始用胰蛋白酶的不溶酶提純胰蛋白酶抑制劑， 等等。經過幾十年的研究，逐漸發展成一種新型的分離技術——親和層析。 細胞內任何一種蛋白質都有專一作用的對象。因此，從原則上講，所有的蛋 白質都能通過親和層析來分離和純化。與蛋白質發生親和作用的基團稱為配 體（ligand）。配體是指能被生物大分子所識別并與之結合的原子、原子基團 和分子。例如，酶的作用底物、輔酶、調節效應物、激素的受體、抗原與抗 體互為配體。
1、親和層析的基本原理蛋白質與配體之間有一種特殊的親和力，在 一定的條件下，它們都緊密結合成復合物，如果將復合物的某一方固定在不 溶性載體上，就可以從溶液中專一性地分離和提純另一方。與其他方法相比， 親和層析能產生絕對的純化作用，因此，可達到較高的純度。采用一般的方 法是提純酶、抑制劑等生物制劑，操作十分復雜，而采用親和層析，只需一 步就能提純百倍，甚至千倍，從而得到純的產品，產率可達到75%~95%。
2、親和層析的基本方法先將提純的某種蛋白質的配體通過適當的化 學反應，共價的連接在載體顆粒表面的功能團上。這種載體材料在其他性能 方面，允許蛋白質自由通過，當含有待提純的蛋白質則與其特異的配體結合， 因而被吸附在配體的載體的顆粒表面，而其他的蛋白質因對這個配體不具有 特異性的結合位點，將通過柱子而流出。被特異地結合在柱子上的蛋白質， 可用自由配體的溶液洗脫下來，或通過改變溶液的pH、離子強度，或采用 一些弱的變性 試劑 減弱其結合，或采用某種更強的結合物質與其競爭，使其 從柱中分離出來，達到純化的目的。
3、固相載體介質一般用作凝膠過濾的介質，大都適用于親和層析的 介質。它們具有穩定的物理和化學性質，具有均勻、多孔的網狀結構，允許 大分子物質自由通過，流動性好，非特異性吸附少。這些固相載體首先要用 化學方法進行活化，使其具備與特定的配體相結合的化學活性基團。
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