黃酮的分離與測定
實驗原理
黃酮類化合物是植物 的重要次生代謝產(chǎn)物，也是一些保健品和中藥材的有效成分之一。黃酮類化合物的定量方法常用的有HPLC法和分光光度法，在實際生產(chǎn)和科研過程中，對于黃酮單體的定量常采用HPLC法，而對總黃酮的測定，考慮到方法的簡便、快捷以及可行性，多采用在堿性介質(zhì)中加鋁鹽顯色的分光光度法。在堿性條件下黃酮類化合物與鋁鹽形成絡(luò)合物、在500nm波長處有最大吸收峰。標(biāo)準(zhǔn)品選用蘆丁。
試劑和器材
一、試劑
蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品。
5％NaNO2；10%A1(NO3)3；5％NaOH；70％乙醇。
二、材料
新鮮銀杏葉。
三、器材
容量瓶10ml（×7），25ml（×1），100ml（×2）；吸管0.5ml（×2），1ml（×2），2ml（×1），5ml（×1）；分光光度計 。
操作方法
一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
精密稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5mg，用70％乙醇溶解，定容于25mL容量瓶中，搖勻，得0．2mg／mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。
精確吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL，分別置于10mL容量瓶中，加入5％NaNO2 0.4mL，搖勻，放置6min；加入10%A1(NO3)30.4mL，搖勻，放置6min；加入5％NaOH 4.0mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min。以試劑空白作為參比溶液。用1cm比色皿，在500nm波長處測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
二、總黃酮的提取
把新鮮的銀杏葉低溫烘干，使水分小于8％，制成干粉。精確稱取干粉1．0g，置于100mL容量瓶中，加入70％乙醇30mL，浸泡24h。超聲波提取30min，過濾，濾液用70％乙醇定容于100mL容量瓶中，得到黃酮提取液，待用。
三、測定
吸取黃酮提取液1.00mL, 置于10mL容量瓶中，加入5％NaNO3 0.4mL，搖勻，放置6min；加入10%A1(NO3)300.4mL，搖勻，放置6min；加入5％NaOH 4.0mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min。以試劑空白作為參比溶液。用1cm比色皿，在500nm波長處測定吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算總黃酮含量。
注意事項
對于某些熱敏成分的提取，采用超聲波破碎法效果較為理想。由于此過程是一個物理過程，浸提過程中無化學(xué)反應(yīng)，被浸提的生物活性物質(zhì)在一定時間內(nèi)保持不變。
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