維生素C的定量測(cè)定（2，6-氯酚靛酚滴定法）
一、目的：
1．學(xué)習(xí)維生素C定量測(cè)定的一般原理，掌握用2，6-二氯酚靛酚滴定法定量測(cè)定食物和生物體液中維生素C的基本操作技術(shù)。
2．概括了解維生素C的生理意義及其在新鮮水果和蔬菜中的含量。
二、原理：
維生素C是人類膳食中必需的維生素之一，如果缺乏維生素C，將導(dǎo)致壞血病發(fā)生。因此，維生素C又稱為抗壞血酸，有防治壞血病的功效?？箟难嵩谧匀唤绶植际謴V泛，存在于新鮮水果和蔬菜中，尤其是檸檬果實(shí)和一些綠色植物（如青辣椒、菠菜等）中含量特別豐富。
抗壞血酸在機(jī)體同具有廣泛的生理功能，已知體內(nèi)許多重要物質(zhì)的代謝反應(yīng)都需要抗壞血酸的參與。它是脯氨酸羥基化酶的輔酶，故有增進(jìn) 膠原蛋白 合成的作用。機(jī)體中許多含疏基的酶，需要依賴于作為還原劑的抗壞血酸的保護(hù)，使酶分子的疏基處于還原狀態(tài)，從而維持其催化活性。由于抗壞血酸的氧化還原作用，它可促進(jìn)免疫球蛋白的合成，增強(qiáng)機(jī)體的抵抗力。同時(shí)還能使氧化型谷胱甘肽轉(zhuǎn)化為還原型谷胱甘肽（簡(jiǎn)稱GSH），而GSH可與重金屬結(jié)合而排出體外，因此維生素C常用于重金屬的解毒。此外，抗壞血酸尚有許多其他生理功能，但其作用機(jī)理還不十分清楚。
抗壞血酸是一種不飽和的多羥基內(nèi)酯化合物，稍有酸味的糖類白色晶體，易溶于水，故屬于水溶性維生素。在溶液中其分子內(nèi)C2和C3之間的烯醇式羥基上的氫極易解離并釋放出H+，而被氧化成脫氫抗壞血酸，氧化后仍具有維生素C的生理活性，但它易分解為二酮古洛糖酸，此化合物不再具有維生素C的生理活性。維生素C有很強(qiáng)的還原性，在堿性溶液中加熱并有氧化劑存在時(shí)，易被氧化而破壞。還原型和氧化型抗壞血酸可以互相轉(zhuǎn)變，在生物組織中自成一氧化還原系統(tǒng)。
由于維生素在營(yíng)養(yǎng)學(xué)和臨床方面的重要意義，故對(duì)食物和生物材料中維生素含量的測(cè)定是十分必須的。抗壞血酸的定量測(cè)定方法很多，有2，6-二氯酚靛酚（簡(jiǎn)稱DCIP）滴定法、碘滴定法、2，4-二硝基苯肼法、Folin 試劑 比色法、紫外吸收法等。其中廣泛采用的是DCIP滴定法，它具有簡(jiǎn)便、快速、比較準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，適用于許多不同類型樣品的分析。缺點(diǎn)是不能直接測(cè)定樣品中的脫氫抗壞血酸及結(jié)合抗壞血酸的含量，易受其他還原物質(zhì)的干擾。如果樣品中含有色素類物質(zhì)，將給滴定終點(diǎn)的觀察造成困難。
在酸性環(huán)境中，抗壞血酸（還原型）能將染料2，6-DCIP還原成無(wú)色的還原型
2，6-DCIP，而抗壞血酸則被氧化成脫氫抗壞血酸。氧化型的2，6-DCIP在中性或堿性溶液中呈藍(lán)色，但在酸性溶液中則呈粉紅色。因此，當(dāng)用2，6-DICP滴定含有抗壞血酸的酸性溶液時(shí)，在抗壞血酸未被全部氧化前，滴下的2，6-DCIP立即被還原成無(wú)色，一旦溶液中的抗壞血酸全部被氧化時(shí)，則滴下微量過(guò)剩的2，6-DCIP便立即使溶液顯示淡粉紅色或微紅色，此時(shí)即為滴定終點(diǎn)，表示溶液中的抗壞血酸剛剛?cè)勘谎趸Ｒ罁?jù)滴定時(shí)2，6-DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液的消耗量（ml），可以計(jì)算出被測(cè)樣品中抗壞血酸的含量。氧化型2，6-DCIP與還原型抗壞血酸常在稀草酸或偏磷酸溶液中進(jìn)行反應(yīng)。即先將樣品溶于一定濃度的酸性溶液中或經(jīng)抽提后，再用2，6-DCIP標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至終點(diǎn)。
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