提高酶產(chǎn)量的措施
在酶的發(fā)酵生產(chǎn)過程中,為了提高酶的產(chǎn)量,除了選育優(yōu)良的產(chǎn)酶細(xì)胞外,還可以采用一些與酶發(fā)酵工藝有關(guān)的措施,例如添加誘導(dǎo)物、控制阻遏物濃度等。例如添加誘導(dǎo)物、控制阻遏物濃度等。
(1)添加誘導(dǎo)物 對(duì)于誘導(dǎo)酶的發(fā)酵生產(chǎn),在發(fā)酵培養(yǎng)基中添加誘導(dǎo)物能使酶的產(chǎn)量顯著增加。一般可分為三類:
①酶的作用底物,例如青霉素是青霉素酚化酶的誘導(dǎo)物。
②酶的反應(yīng)產(chǎn)物,例如纖維素二糖可誘導(dǎo)纖維素酶的產(chǎn)生。
③酶的底物類似物,例如異丙基-?-D-硫代半乳糖昔(IPTG)對(duì)?-半乳糖昔酶的誘導(dǎo)效果比乳糖高幾百倍。
其中使用最廣泛的誘導(dǎo)物是不參與代謝的底物類似物。
(2)降低阻遏物濃度 微生物酶的生產(chǎn)受到代謝末端產(chǎn)物的阻遏和分解代謝物阻遏的調(diào)節(jié)。為避免分解代謝物的阻遏作用,可采用難于利用的碳源,或采用分次添加碳源的方法使培養(yǎng)基中的碳源保持在不致于引起分解代謝物阻遏的濃度。例如在丹半乳糖昔酶的生產(chǎn)中,只有在培養(yǎng)基中不含葡萄糖時(shí),才能大量誘導(dǎo)產(chǎn)酶。對(duì)于受分解代謝物阻遏的酶,可通過控制末端產(chǎn)物的濃度使阻遏解除,例如,組氨酸的合成途徑中,10種酶的生物合成受到組氨酸的反饋?zhàn)瓒簦粼谂囵B(yǎng)基中添加組氨酸類似物,如 2-噻唑丙氨酸,可使這10種酶的產(chǎn)量增加10倍。
(3)表面活性劑 在發(fā)酵生產(chǎn)中,非離子型的表面活性劑常被用作產(chǎn)酶促進(jìn)劑,但它的作用機(jī)理尚未搞清;可能是由于它的作用改變了細(xì)胞的通透性,使更多的酶從細(xì)胞內(nèi)透過細(xì)胞膜泄漏出來,從而打破了胞內(nèi)酶合成的反饋平衡,提高了酶的產(chǎn)量。此外,有些表面活性劑對(duì)酶分子有一定的穩(wěn)定作用,可以提高酶的活力,例如在霉菌的發(fā)酵生產(chǎn)中添加 1%的吐溫可使纖維素酶的產(chǎn)量提高幾倍到幾十倍。
(4)添加產(chǎn)酶促進(jìn)劑 產(chǎn)酶促進(jìn)劑是指那些能提高酶產(chǎn)量但作用機(jī)理尚未闡明的物質(zhì),它可能是酶的激活劑或穩(wěn)定劑,也可能是產(chǎn)酶微生物的生長(zhǎng)因子,或有害金屬的螫合劑,例如添加植酸鈣可使多種霉菌的蛋白酶和橘青霉的5`一磷酸二酯酶的產(chǎn)量提高2—20倍。
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