大腸桿菌DNA聚合酶作用和分類
重組DNA技術工具酶
大腸桿菌DNA聚合酶(E.coli DNA polymerase)主要有3種作用：
①5’→3’的聚合作用。但不是復制染色體而是修補DNA，填補DNA上的空隙或是切除RNA引物后留下的空隙。
②3’→5’的外切酶活性。消除在聚合作用中摻入的錯誤核苷酸。
③5’→3’外切酶活性。切除受損傷的DNA。它在切口平移(nick translation)中應用。
大腸桿菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段是完整的DNA聚合酶Ⅰ的一個片段，只有在5’→3聚合酶活性和3’→5’外切酶活性，失去了5’→3外切酶活性。它可用于填補DNA單鏈末端成為雙鏈。如果供給32P標記的三磷酸核苷酸，則可使DNA帶上同位素標記。當用交錯切割的限制酶切成帶有單鏈粘性末端的DNA片段，要用被切成平頭末端的DNA片段連接時，可以先用Klenow片段使粘性末端的單鏈補齊成為平頭，然后在DNA連接 酶作用下把兩個DNA片段連接起來。
另外還有大腸桿菌DNA聚合酶 Ⅱ和大腸桿菌DNA聚合酶Ⅲ。前者不能利用單鏈DNA或poly(dA-dT)為模板。需有鎂離子和dNTP時才能表現出酶活性，無自發合成DNA的作用。后者沒有5’→3外切酶活性，也不能用單鏈DNA作為模板。
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