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血糖的測定及激素對血糖濃度的影響
發布日期:2022-07-22 08:24:54


血糖的測定及激素對血糖濃度的影響


I . 鄰甲苯胺法(O-T法)


【基本原理】


葡萄糖的醛基與鄰甲苯胺在熱醋酸溶液中縮合成葡萄糖基胺,再脫水生成希夫氏(Schiff)堿,然后經分子重排,生成一組藍綠色化合物,在630nm處有一吸收峰,吸光度大小與血糖濃度成正比。


【器材】


水浴箱、 試管、分光光度計。


【 試劑 】


1.鄰甲苯胺 試劑 取冰醋酸(AR)940ml,加入硫脲(AR)1.5g,溶解后加入鄰甲苯胺60 ml混勻,置棕色瓶中,室溫保存。新配試劑應放置24小時后(待老化)使用。此試劑腐蝕性極強,應避免與皮膚接觸而造成灼傷。


2.12mmol/L苯甲酸溶液 稱取苯甲酸1.4g,加入蒸餾水900ml,加熱助溶,冷卻后加蒸餾水至1000ml。


3.葡萄糖標準貯存液(100mmol/L) 準確稱取無水葡萄糖(預先置80℃烤箱中干燥至恒重,移置干燥器中保存)1.802g,用12mmol/L苯甲酸溶液溶解,移至100ml容量瓶中,再以12mmol/L苯甲酸溶液稀釋至刻度,搖勻,移入棕色瓶中,冰箱內保存。


4.葡萄糖標準應用液(5mmol/L)準確吸取葡萄糖標準貯存液5.0ml,置于100ml容量瓶中,再以12mmol/L苯甲酸溶液稀釋至刻度。


【操作步驟】

混勻,置沸 水浴 中煮沸12分鐘,取出置流水中冷卻5分鐘用分光光度計波長630nm,以空白調零,讀取各管吸光度。



[注]


1.鄰甲苯胺與葡萄糖的反應并非特異 ,其他糖在反應中亦能產生與葡萄糖相似的吸收光譜,它們的相對吸光度比率分別為:葡萄糖=1.00;果糖=0.06;甘露糖=0.96;半乳糖=1.42;蔗糖=0.16。但這些糖中只有葡萄糖、果糖、半乳糖存在于正常人血清中,而后兩者在正常人血液中含量甚微,不影響試劑測定結果。


2.葡萄糖與鄰甲苯胺的呈色強度與反應條件(鄰甲苯胺和冰醋酸的批號、試劑配制后保存的時間以及加熱溫度和時間)有關。因此,各管的反應條件必須完全一致。


3.鄰甲苯胺為淺黃色油狀液體,易被氧化成紅棕色,用此種鄰甲苯胺配制的試劑、空白管顏色深,反應靈敏度低,嚴重影響測定結果。須經以下方法處理方可應用:在500ml鄰甲苯胺中加入鹽酸羥胺0.5g,置50~60℃ 水浴 中20分鐘并不時搖動,使鄰甲苯胺還原,顏色變淺。如上述處理不夠理想,則將鄰甲苯胺用全玻璃 蒸餾 器重 蒸餾 ,收集199~201℃無色或淺黃色的流出液,置棕色瓶加黑紙袋避光密封保存。

II. 胰島素和腎上腺素對血糖濃度的影響

【基本原理】


人和動物體內,血糖濃度受各種激素調節而維持恒定。胰島素能降低血糖;其他很多激素則具有升高血糖的作用,其中以腎上腺素作用較為迅速而明顯。胰島素促進肝臟和肌肉將葡萄糖合成糖元,又加強糖的氧化作用,故可以降低血糖;腎上腺素促進肝糖元分解而增高血糖。

此實驗觀察家兔注射胰島素和腎上腺素前后的血糖濃度變化。


【器材】


注射器 、針頭、刀片、 分光光度計 。


【試劑】


1.腎上腺素和胰島素


2.草酸鈉


3.25%葡萄糖


【基本操作】


1.動物準備


取正常家兔兩只,實驗前預先饑餓,稱體重(一般為2~3kg)。


2.取血


一般多以耳緣靜脈取血,先去毛,用二甲苯擦拭兔耳,使其血管充血,再用干棉球擦干,于放血部位涂一薄層凡士林,再用粗針頭刺破靜脈放血,將血液收入抗凝管中(每ml血約需2mg草酸鈉)邊收集邊搖勻,以防凝固。用干棉球壓迫血管止血。


3.注射激素后取血


取餓兔血后,其中一只兔皮下注射胰島素,劑量按0.75單位/公斤體重計算,并記錄注射時間。一小時后再取血。取血后立即腹腔或皮下注射25%葡萄糖液10ml,以免家兔發生胰島素性休克而死亡。


另一只兔皮下注射腎上腺素,劑量按0.4mg/公斤體重計算,并記錄注射時間。半小時后再取血。


[計算]


算出注射胰島素后血糖降低和注射腎上腺素后血糖增高的百分率。


測血糖常用化學法有鄰甲苯酚法,常用酶法為葡萄糖氧化酶法、己糖 激酶 法。





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