牛奶中提取酪蛋白
[目的與要求]
1、了解等電點沉淀法
2、學習從牛奶中制備酪蛋白的方法
3、加深對蛋白質等電點性質的理解
[原理]
蛋白質是一種親水膠體，在水溶液中蛋白質分子表面形成一個水化層。另外，蛋白質又是一種兩性離子，在一定pH溶液能夠維持一個穩定的狀態。
但是調節蛋白質溶液的pH值至等電點時，蛋白質會因失去電荷而變得不穩定，此時若再加脫水劑或加熱，水化層被破壞，蛋白質分子就相互凝聚而析出。等電點沉淀法主要利用兩性電解質分子在等電點時溶解度最低的原理，而多種兩性電解質具有不同等電點而進行分離的一種方法。
牛乳中主要的蛋白質是酪蛋白含量約為35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白質的混合物，等電點為4.7。將牛乳的pH調至4.7時，酪蛋白就沉淀出來。用乙醇洗滌沉淀，除去脂類雜質后便可得到較純的酪蛋白。
但單獨利用等電點沉淀法來分離生化產品效果并不太理想，因為即使在等電點時，有些兩性物質仍有一定的溶解度，并不是所有的蛋白質在等電點時都能沉淀下來，特別是同一類兩性物質的等電點十分接近時。生產中常與有機溶劑沉淀法、鹽析法并用，這樣沉淀的效果較好。
本實驗目的是使學生運用等電點沉淀法制備酪蛋白，從中加深對蛋白質等電點性質的理解。
[方法和步驟]
1、取預先放冰箱中冷卻的消毒牛奶6mL，3 000r/min離心10min，除去脂肪層的乳液置50毫升燒杯內，加熱至40℃左右，在攪拌下慢慢加入10mL左右預熱的醋酸-醋酸鈉緩沖液，此時混濁液中有大量絮狀物沉下。冷至室溫，3 000r/min離心10min，棄去上清液，得酪蛋白粗品。
2、用 蒸餾 水洗沉淀三次（每次5mL左右），3 000r/min離心10min，棄去上清液。
3、將沉淀置研缽中，研碎后，漸加5mL 95%乙醇，靜置片刻，將全部懸浮液轉移至布氏漏斗抽濾，抽干后的制品，用乙醇-乙醚混合液洗沉淀二次（每次5mL），最后用無水乙醚洗沉淀二次（每次5mL），抽干。
4、將沉淀攤開在表面皿上，風干，得酪蛋白制品（稱重，記錄）。
5、酪蛋白溶液的配制：稱取酪蛋白0.1g，置10毫升燒杯中，加5mL 0.2mol/L氫氧化鈉溶液，攪勻， 隔水加熱，溶解后轉移至10毫升容量瓶中，用少量 蒸餾 水洗 燒杯 數次，洗液并入 容量瓶 中，最后加水至刻度處，搖勻，置冰箱中保存備用。
[結果與計算]
計算酪蛋白含量和得率：
1、含量：酪蛋白克數/100mL牛奶
2、 式中理論含量3.5g/100mL牛奶
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