13種蛋白濃縮方法的應用過程需知
蛋白濃縮在免疫學中應用廣泛，蛋白濃縮的方法數數還不少：聚乙二醇沉淀法、冷凍干燥濃縮法、超濾膜濃縮法、有機溶劑沉淀法……那么，這些方法用的時候該注意哪些問題呢？
1、丙酮沉淀法：三氯醋酸沉淀法試驗要求的儀器簡單，但是常常導致蛋白質變性。
2、免疫沉淀法：得有特異性抗體
3、硫酸銨沉淀法：利用高濃度鹽將蛋白質析出(鹽析)，選擇硫酸按是因為：鹽析有效性，pH范圍廣，溶解度高，溶液散熱少，經濟，大多數的蛋白都可以用資格方法
4、聚乙二醇沉淀法：使用PEG時旨在個別情況下才會是蛋白質稍有變性!他溶解是散熱低，形成沉淀的平衡時間短，通常達到30%時蛋白質就會達到最大量的沉淀!
5、離子交換層析：可用陰離子交換樹脂進行濃縮。
6、透析袋濃縮法：利用透析袋濃縮蛋白質溶液是應用最廣的一種。將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋(無透析袋可用玻璃紙代替)，結扎，把高分子(6 000-12 000)聚合物如聚乙二醇(碳蠟)、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可。也可將吸水劑配成30%-40%濃度的溶液，將裝有蛋白液的透析袋放入即可。吸水劑用過后，可放入溫箱中烘干或自然干燥后，仍可再用。
主要用于更換蛋白質的緩沖液，得有透析袋。不需要特殊的儀器 。一般用得是PEG20000進行實驗，簡單，快速，對蛋白沒什么影響
7、冷凍干燥濃縮法：這是濃縮蛋白質的一種較好的辦法，它既使蛋白質不易變性，又保持蛋白質中固有的成分。它是在冰凍狀態下直接升華去除水分。具體做法是將蛋白液在低溫下冰凍，然后移置干燥器內(干燥器內裝有干燥劑，如NaOH、CaCl2和硅膠等)。密閉，迅速抽空，并維持在抽空狀態。數小時后即可獲得含有蛋白的干燥粉末。干燥后的蛋白質保存方便，應用時可配成任意濃度使用。也可采用凍干機進行冷凍干燥。
8、吹干濃縮法：將蛋白溶液裝入透析袋內，放在電風扇下吹。此法簡單，但速度慢，且溫度不能過高，最好不要超過15 ℃。
9、超濾膜濃縮法：此法是利用微孔纖維素膜通過高壓將水分濾出，而蛋白質存留于膜上達到濃縮目的。有兩種方法進行濃縮：一種是用醋酸纖維素膜裝入高壓過濾器內，在不斷攪拌之下過濾;另一種是將蛋白液裝入透析袋內置于真空干燥器的通風口上，負壓抽氣，而使袋內液體滲出。
10、凝膠濃縮法：選用孔徑較小的凝膠，如SephadexG25或G50，將凝膠直接加入蛋白溶液中。根據干膠的吸水量和蛋白液需濃縮的倍數而稱取所需的干膠量。放入冰箱內，凝膠粒子吸水后，通過離心除去。
11、濃縮膠濃縮法：濃縮膠是一種高分子網狀結構的有機聚合物，具有很強的吸水性能。每克干膠可吸水120 ml～150 ml。它能吸收低分子量的物質，如水、葡萄糖、蔗糖、無機鹽等，適宜濃縮10 000分子量以上的生物大分子物質。濃縮后，蛋白質的回收率可達80%～90%。比濃縮膠應用方便，直接加入被濃縮的溶液中即可。必須注意，濃縮溶液的pH值應大于被濃縮物質的等電點，否則在濃縮膠表面產生陽離子交換，影響濃縮物質的回收率。
12、鹽析法：多用于各種蛋白質和酶的分離純化。一般來說，所有固體溶質都可以在溶液中加入中性鹽而沉淀析出，這一過程叫鹽析。如硫酸銨沉淀法。
13、有機溶劑沉淀法：有機溶劑的沉淀機理是降低水的介電常數，導致具有表面水層的生物大分子脫水，相互聚集，最后析出。
該法優點在于：
（1）分辨能力比鹽析法高，即蛋白質或其它溶劑只在一個比較窄的有機溶劑濃度下沉淀;
（2）沉淀不用脫鹽，過濾較為容易;
（3）在生化制備中應用比鹽析法廣泛。其缺點是對具有生物活性的大分子容易引起變性失活，操作要求在低溫下進行。
總體來說，蛋白質和酶的有機溶劑沉淀法不如鹽析法普遍。
有機溶劑的選擇首先是能和水混溶，使用較多的有機溶劑是乙醇、甲醇、丙酮，還有二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、乙腈和2-甲基-2,4戊二醇等。
有多種因素影響有機溶劑的沉淀效果：
（1）溫度：低溫可保持生物大分子活性，同時降低其溶解度，提高提取效率;
（2）樣品濃度和PH：與鹽析法中的作用基本相同;
（3）金屬離子：一些多價陽離子如Zn2+和Ca2+在一定PH下能與呈陰離子狀態的蛋白質形成復合物，這種復合物在水中或有機溶劑中的溶解度都大大下降，而且不影響蛋白質的生物活性。
（4）離子強度：鹽濃度太大或太低都對分離有不利影響，對蛋白質和多糖而言鹽濃度不超過5%比較合適，使用的乙醇量不超過二倍體積為宜。
強調低溫(0-4度以下)是因為10度時蛋白會在有機溶劑中變性，可用乙醇，丙酮……注意：Mg離子，pH值
有機溶劑沉淀法不如鹽析法應用普遍，溫馨提示：在十度以下的條件下，蛋白質會在有機溶劑中變性，這時要注意選用合適的有機溶劑：如乙醇，丙酮，還有，注意：鎂離子和pH值 。
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