雙縮脲法測定蛋白質含量
實驗目的：
1.掌握分光光度計的使用方法。
2.掌握標準管法測物質含量的方法。
3.掌握雙縮脲法測定蛋白質含量的方法。
一、原理：
雙縮脲是由兩分子尿素縮合而成的化合物，在堿性溶液中與硫酸銅反應生成紫紅色絡合物，此反應即為雙縮脲反應。含有兩個或兩個以上肽鍵的化合物都具有雙縮脲反應。
蛋白質含有多個肽鍵，在堿性溶液中能與Cu 2+ 絡合成紫紅色化合物。其顏色深淺與蛋白質的濃度 成正比，可以用比色法進行測定。雙縮脲法最常用于需要快速但并不需要十分精確的測定。
二、 試劑 和器材
試劑 :
(1) 標準蛋白溶液（5mg/ml）:準確稱取已定氮的酪蛋白(干酪素或牛血清白蛋白)用0．05mol/L氫氧化鈉溶液配制，冰箱存放備用。
(2) 雙縮脲試劑:溶解1.5g硫酸銅（CuSO 4 ·5H 2 O）和6.0g酒石酸鉀鈉（NaKC 4 H 4 O 6 ·4H 2 O）于500ml蒸餾水中，在攪拌下加入300ml10％氫氧化鈉溶液，用水稀釋到1000ml，貯存于內壁涂以石蠟的瓶內。此試劑可長期保存。
(3) 樣品血清:動物血清用水稀釋10倍，置于冰箱保存備用。
標準曲線法所用的血清需20倍稀釋。
器材:分析天平、分光光度計、 恒溫水浴箱、 試管 、 吸量管等
三、操作方法：
1.取三支 試管 按下表操作
| 試管號 | 空白管 | 標準管 | 測定管 |
| 血清（mL） | 0 | 0 | 1.0 |
| 標準蛋白（mL） | 0 | 1.0 | 0 |
| 蒸餾水（mL） | 2.0 | 1.0 | 1.0 |
| 雙縮脲試劑（mL） | 4.0 | 4.0 | 4.0 |
2、搖勻，37℃ 水浴 20min后用 分光光度計 于540nm波長處比色，以空白管調零點，測得各管吸光度。
3、計算：
血清 總蛋白 質(g／100ml）＝A 測 /A 標 ×0.005×100/0.1
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