蛋白質(zhì)的鑒定與分析

從復(fù)雜混合物中純化目標蛋白的方法很多，但制備層析純化最常用。層析類型的選用取決于目標蛋白的理化特性。依據(jù)制備或定量分析，選用快速蛋白液相層析或高效液相層析。還可以選擇下列層析或其組合：疏水作用柱層析，離子交換柱層析、分子棑阻層析及親和層析。 如果僅需少量目標蛋白，可采用電泳技術(shù)。已知蛋白分子量，就可在電泳膠的相應(yīng)位置，切割蛋白條帶用于下一步質(zhì)譜分析。通常 SDS-PAGE提供蛋白分子大小信息。如將等電聚焦膠條上樣于SDS-PAGE，則是二維電泳，它提供蛋白質(zhì)等電點和分子量信息。二維膠條的分辨率比一維膠條大大提高。 假如目標蛋白含量太少，可使用特異性抗體進行免疫印跡。抗體還可用于分離純化蛋白。由于抗體結(jié)合的專一性，大多數(shù)最終產(chǎn)品都可以利用目標蛋白的抗體加以純化。利用能結(jié)合大多數(shù)抗體分子的蛋白A偶聯(lián)的或蛋白G偶聯(lián)的瓊脂糖凝膠，幾乎所有抗體通過幾輪離心就得到少量純品。酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)技術(shù) 是利用抗體的靈敏分析方法。無須純化，ELISA可鑒別并定量目標蛋白。 如果抗體足夠，還可通過免疫組織化學(xué)或免疫熒光標記對機體組織及細胞中的目標蛋白進行定位及原位含量測定。 除抗體外，還可使用適配器，即特異性結(jié)合靶蛋白的核酸大分子研究目標蛋白。可通過SELEX，即指數(shù)富集配基系統(tǒng)進化技術(shù)篩選獲得。由于極易化學(xué)合成，適配器將來會取代抗體。 近年來，液質(zhì)聯(lián)用越來越廣泛用于靶蛋白鑒定，但質(zhì)譜僅局限于定性分析。代謝標記在實驗室受控培養(yǎng)條件下可定量。借助痕量靶蛋白的序列信息，代謝標記技術(shù)已成為精確可靠的蛋白質(zhì)分析方法。最近，通過二維樣本的質(zhì)譜數(shù)據(jù)集成像或圖譜成像，質(zhì)譜成像（也稱成像質(zhì)譜）已成為直接檢測組織或細胞特定區(qū)域蛋白質(zhì)的有效手段。該方法僅憑觀察組織細胞，就能原位探測靶蛋白的有無。也可在復(fù)雜情況下快速準確地探測特定生物標志物分子的有無。

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