大腸桿菌和酵母體系分別怕什么菌?
大腸桿菌體系——噬菌體和芽孢桿菌是兩大威脅
大腸桿菌是最早用于胰島素生產的宿主菌,目前仍有大量企業在使用。
噬菌體污染是大腸桿菌體系最致命的威脅。生產菌株被噬菌體侵染后迅速裂解,發酵液OD下降、pH回升、溶氧抬頭,2-4小時內整罐報廢。噬菌體的難搞在于它可通過空氣、人員、原料多渠道傳播,且在環境中存活時間長。
芽孢桿菌污染同樣常見??莶菅挎邨U菌、地衣芽孢桿菌的孢子耐熱性強,常規121℃、30分鐘滅菌如果存在死角,孢子就存活下來,萌發后搶奪營養、產酸,干擾生產菌代謝。
畢赤酵母體系——細菌和霉菌是主要對手
畢赤酵母生長速度慢,發酵周期長達5-7天,染菌風險比大腸桿菌更高。酵母體系的pH通常維持在5.0-6.0的弱酸性環境,這個條件對細菌有一定抑制作用,但攔不住芽孢桿菌和假單胞菌。
霉菌污染在酵母體系中比較常見。霉菌孢子廣泛存在于空氣和環境中,空氣過濾系統一旦失效,霉菌孢子隨壓縮空氣進入發酵罐。酵母體系發酵周期長,霉菌有充足的時間萌發和繁殖。
污染主要發生在哪些環節?
種子擴培階段是污染的高發窗口。工作種子庫取出、搖瓶接種、一級種子罐培養到二級種子罐放大,每一級轉接都是無菌邊界的主動打開,操作稍有疏忽就帶菌。
發酵罐培養階段,空氣過濾系統失效是最隱蔽的污染來源。濾芯受潮、破損或疏水閥堵塞,雜菌跟著壓縮空氣直接進罐。設備滲漏也是常見問題——冷卻盤管微漏、軸封磨損、閥門密封不嚴,冷卻水或沖洗水中的雜菌反向滲入發酵體系。
補料和取樣操作同樣高風險。補料罐和管道滅菌不徹底、補料接口對接時火焰保護不到位、取樣后閥后殘液倒吸,都會為雜菌進入留下通道。


