微生物純培養的獲得方法

微生物在自然界總是混雜地生活在一起，要想研究某一種微生物，必須把研究對象從混雜群體中分離出來。

微生物學中把從一個細胞或一群相同的細胞經過培養繁殖而得到的后代稱純培養。

獲得純培養的方法

稀釋倒平板法

涂布平板法

平板劃線分離法

選擇培養基分離法

單細胞(單孢子)分離法

涂布平板法

涂布平板法是將稀釋的微生物懸液滴在無菌瓊脂平板表面，用涂布棒均勻涂布并進行恒溫培養的方法，主要用于微生物分離純化及活菌計數。

涂布平板法操作流程

①?制備平板?（將熔化并冷卻至 45-50℃的固體培養基倒入無菌培養皿，凝固后形成平板。??）

②?菌液稀釋?（對微生物懸液進行系列梯度稀釋，以獲得合適濃度的菌液。??）

③?涂布接種?（吸取?0.1-0.2mL?稀釋菌液滴加到平板表面，使用經酒精浸泡并灼燒滅菌的涂布器，冷卻后在平板表面均勻涂布。??）

④?恒溫培養?（涂布后靜置數分鐘使菌液滲透，將平板?倒置?放入恒溫培養箱中培養，直至長出菌落。??）

稀釋倒平板法

稀釋倒平板法是指待分離微生物樣品經過一系列梯度（一般10倍遞增）稀釋后，使微生物菌體充分分散，成為單細胞，然后再取出一定量稀釋液和固體培養基混勻，傾注到固體培養基的方法，再經過適宜的培養條件，形成單菌落的過程。

平板劃線分離法

平板劃線分離法是通過接種環在瓊脂平板表面分區或連續劃線，將聚集的菌種逐步稀釋分散，經培養后獲得單個菌落的實驗方法 。??

平板劃線分離法操作流程

①取菌液?（將冷卻后的接種環伸入菌液試管，輕輕沾取少量樣本，注意不要觸碰管壁。）

②?分區劃線?（?第一區?：在平板邊緣一處作平行劃線 3-5 條，約占平板面積 1/4。??后續區域?：灼燒接種環滅菌并冷卻，轉動平板約 60-70°，從上一區域末端開始劃下一區，重復 2-3 次 。???）or連續劃線?（從邊緣一點開始，連續作波浪式或“之”字形劃線直到另一端，中間不需灼燒 。??）

③?倒置培養?（劃線完畢后蓋上皿蓋，將平板倒置于 37℃（或 28-30℃）恒溫培養箱中 。??）

④?時間控制?（通常培養 24-48 小時，具體時間取決于菌種生長特性 。???）

⑤?結果觀察?（觀察末端是否出現單個菌落，理想情況下第三、四區應分布有獨立的單菌落。）

                       單細胞分離法

單細胞(單孢子)分離法

單細胞(單孢子)分離法是在顯微鏡下從混雜群體中直接分離單個細胞或單個個體進行培養獲得純培養的方法。

毛細管法（用毛細管提取微生物個體，適于較大微生物。）

顯微操作儀（使用單孢子分離器用顯微針、鉤、環等挑取單個細胞或孢子。）

小液滴法（將經過適當稀釋后的樣品制成小液滴，在顯微鏡下選取只含一個細胞的液滴來進行純培養物的分離。）

選擇培養基分離法

各種微生物對不同的化學試劑、染料、抗生素等具不同的抵抗能力，利用這些特性可配制合適某種微生物而限制其它微生物生長的選擇培養基，用它來培養微生物以獲得純培養。

            在選擇培養基上某些菌落無法正常生存

選擇分離培養基依據

根據所要分離的菌種的特性選用培養基（分離真菌用馬丁氏培養基，pH偏酸；分離放線菌用高氏1號，pH中性偏堿。）

根據不同菌對化學試劑的敏感性（分離放線菌，培養基中加10%酚，抑制細菌、真菌；從土壤中分離真菌，加孟加拉紅，抑制細菌生長。）

根據分離對象的營養特征（分離能發酵纖維素的菌株，培養基以纖維素為唯一碳源。分離固氮菌，用無氮培養基。）

為了從混雜的微生物群體中分離出某種微生物，可以根據該微生物的特點，包括營養、生理、生長條件等，采用選擇培養的方法進行分離。

利用選擇培養基進行直接分離

富集培養。