細胞培養(yǎng)瓶里的“小黑點”，是污染還是細胞碎片？

養(yǎng)細胞的人，大概都經(jīng)歷過這種時刻：

某天照常看細胞，突然發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶里多了一些“小黑點”。它們靜靜地飄在培養(yǎng)基里，或附著在細胞周圍，不仔細看還發(fā)現(xiàn)不了。

然后你開始糾結：這是污染嗎？要不要趕緊扔？還是說只是細胞碎片，再養(yǎng)養(yǎng)看看？

糾結的結果，往往是最壞的那種——該扔的時候沒舍得扔，最后整批細胞都廢了；不該扔的時候扔了，白白浪費了幾周的心血。

一、先看動還是不動

動的，大概率是污染；不動的，可能是碎片。

在顯微鏡下觀察，如果小黑點在原地布朗運動（不規(guī)則抖動），或者能明顯看到它們在游動，基本可以斷定是細菌污染。細菌個頭小、數(shù)量多、活躍度高，會隨著培養(yǎng)液流動。

如果小黑點不運動，或者隨著細胞分裂被“稀釋”掉，那更可能是細胞碎片、死細胞殘留、或者血清里的蛋白沉淀。

二、再看污染速度

細菌污染的典型特征是快。

今天看到幾個小黑點，明天可能就密密麻麻，培養(yǎng)基也開始變黃、渾濁。如果污染源是支原體，速度會慢一些，但細胞狀態(tài)會持續(xù)變差——長得慢、形態(tài)異常、容易脫落。

細胞碎片則不會“擴散”。如果一瓶細胞剛傳代完有很多小黑點，但兩三天后細胞長起來了，碎片反而變少了，那基本可以放心。

三、三種常見情況，分別怎么處理

情況一：明顯是細菌污染
直接扔掉，不要猶豫。加抗生素“搶救”是徒勞的，只會讓污染反復發(fā)作，還浪費試劑。處理完用84消毒液泡一下瓶子，徹底清潔培養(yǎng)箱和超凈臺。

情況二：疑似支原體污染
細胞狀態(tài)越來越差，但培養(yǎng)基不渾濁、顯微鏡下也看不見明顯菌體。這時候需要做支原體檢測。如果陽性，果斷丟棄；如果細胞非常珍貴，可以用支原體清除試劑處理，但處理后要復檢，確認陰性才能繼續(xù)使用。

情況三：只是細胞碎片或蛋白沉淀
這種情況最容易被誤判。如果細胞狀態(tài)正常、貼壁良好、增殖速度沒問題，那就繼續(xù)養(yǎng)，別折騰。可以嘗試換液：吸掉舊培養(yǎng)基，用PBS輕輕洗一遍，再加新鮮培養(yǎng)基，大部分碎片就會被帶走。

四、怎么減少“小黑點”的出現(xiàn)

預防總比糾結省心。

• 血清要熱滅活嗎？ 不一定。但如果有蛋白沉淀，可以離心去除（1000rpm，5分鐘），而不是盲目熱滅活。

• 消化要適度。胰酶消化時間太長，細胞膜受損，碎片自然多。

• 換液動作要輕。吹打太猛、沖洗太用力，都會把細胞沖碎。

寫在最后

“小黑點”這件事，說到底是個經(jīng)驗活。養(yǎng)多了自然能分辨：是污染還是碎片，心里大概有數(shù)。

但有一條原則值得記住：當你開始糾結它是不是污染的時候，它很可能就是。

與其在一瓶可疑的細胞上耗費時間，不如果斷處理、從頭再來。實驗的節(jié)奏，比一瓶細胞重要得多。