極性大的酸性化合物的HPLC分離策略
一、小分子有機酸
代表：草酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、琥珀酸、酒石酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸
HPLC策略1：HILIC
色譜柱：酰胺鍵合相 / 裸硅膠 / 二醇基 / 氨基 流動相：高比例乙腈（70–90%）+ 10 mM 甲酸銨 / 乙酸銨（pH 5–6.5） 檢測器：RI/質譜 HPLC策略2：離子排阻
色譜柱：有機酸專用柱（氫柱） 流動相：稀硫酸 檢測器：RI/紫外210nm HPLC策略3：C18
色譜柱：保留強C18長柱 流動相：磷酸水+乙腈 檢測器：RI/紫外210nm
二、寡核苷酸
寡核苷酸：由100個以內的核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸單鏈或雙鏈組成的核苷酸。 特點：磷酸基團，強酸性、強極性、水溶性。
HPLC 策略1：反相離子對色譜
色譜柱：C18 流動相：乙腈+水（離子對試劑主要有醋酸-三乙胺（TEAA）、碳酸-三乙胺（TEAB）、六氟異丙醇（HFIP）-三乙胺） 檢測器：紫外260nm
HPLC 策略2：陰離子交換色譜
色譜柱：WAX色譜柱 流動相：20mM Tris-Hcl水溶液（pH8.0）和1M氯化鈉溶液 檢測器：紫外260nm
HPLC 策略3：親水相互作用色譜（HILIC）
色譜柱：Hilic色譜柱 流動相：20mM 乙酸銨水溶液和乙腈 檢測器：紫外260nm
三、 酚酸類（中藥 / 天然藥里極常見）
代表：沒食子酸、原兒茶酸、綠原酸、咖啡酸、阿魏酸、丹酚酸 特點：既有酚羥基，又有羧基，極性大、易電離、易拖尾。
HPLC 策略：常規反相 C18
色譜柱：C18色譜柱 流動相：乙腈 + 水 （0.1%磷酸 / 甲酸 / TFA）
檢測器：紫外檢測器（280nm）
四、 極性氨基酸（酸性氨基酸）
代表：谷氨酸、天冬氨酸、絲氨酸、甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸 特點：強極性、兩性離子。
HPLC 策略1：反相衍生法（OPA、PITC）
HPLC 策略2：HILIC
色譜柱：Hilic色譜柱 流動相：20mM 甲酸銨水溶液和乙腈 檢測器：質譜
HPLC 策略3：離子交換色譜法（柱后衍生）
色譜柱：強酸性陽離子交換色譜柱 流動相：緩沖鹽濃度梯度，pH梯度洗脫 檢測器：紫外可見570nm（柱后茚三酮衍生）
五、 磺酸類 / 強酸性表面活性劑
代表：十二烷基磺酸鈉、對甲苯磺酸、牛磺酸 特點：強酸、完全電離、極性大，C18 完全不保留。
HPLC 策略：離子對色譜
色譜柱：C18色譜柱 流動相：四丁基溴化銨 / 四丁基氫氧化銨（pH 5–7）水溶液+乙腈
