GB4789.6致瀉大腸埃希氏菌檢驗

一、核心流程（5步不迷路）

1. 樣品前處理

25g樣品+225mL營養肉湯，均質1–2min；冷凍樣≤45℃水浴≤15min快速解凍。

2. 預增菌+選擇性增菌

- 預增菌：36℃±1℃培養6h

- 轉種：取10μL至腸道菌增菌肉湯，42℃±1℃培養18h

3. 分離培養（雙平板必做）

劃線MAC+EMB（或SMAC/O157顯色），36℃±1℃ 18–24h

- MAC：乳糖發酵→紅/桃紅；不發酵→無色/淡粉

- EMB：發酵→黑中心±金屬光澤；不發酵→無色/淡粉

- SMAC：O157不發酵山梨醇→無色菌落

4. 初步生化（TSI+IMViC）

挑≥5個可疑菌落做TSI、動力、氧化酶、IMViC

- TSI：斜面/底層均黃、產氣±、H?S-

- 動力：多數+；EIEC多-

- 氧化酶-；IMViC：++--（典型大腸）

5. 確證（血清+PCR，雙陽性才報告）

- 血清：O抗原群→H抗原；O157:H7單克隆抗體初篩 

- PCR：毒力基因（eae/ipaH/est/elt/stx1/stx2/aggR）

- 僅生化+血清+毒力基因三符合，方可報告

?? 十大常見錯誤+排查（實驗員保命）

1. 增菌溫度/時間錯

? 預增菌超時、選擇性增菌用36℃

? 預增菌嚴格6h；腸道增菌必須42℃18h

2. 只種一種平板

? 漏MAC/EMB，或O157不種SMAC

? 固定MAC+EMB雙平板；O157必加SMAC/顯色

3. 可疑菌落挑太少

? 只挑1–2個，漏混合菌/弱毒菌株

? 每樣至少挑5個無色/可疑菌落

4. TSI判讀錯誤

? 誤判H?S+、產氣-，或只看斜面

? 志賀樣大腸：斜面/底層黃、H?S-；產氣常見但非必需

5. 漏做動力/氧化酶

? 跳過關鍵生化，誤判為其他菌

? 必做：氧化酶-、動力多數+（EIEC除外）

6. 血清學亂序/無對照

? 直接上單價、不做鹽水對照、血清過期

? 流程：多價→分群→單價；每步設鹽水對照 

7. PCR缺對照/污染

? 無陽/陰/空白對照，出現假陽/假陰

? 每批PCR：標準菌株陽+普通大腸陰+水空白

8. 毒力基因漏檢

? 只做血清不做PCR，誤報非致瀉株

? 按類型必檢：EPEC(eae)、EIEC(ipaH)、ETEC(est/elt)、STEC(stx1/stx2+eae)、EAEC(aggR)

9. 培養基反復融/過期

? 選擇性培養基高壓/反復加熱，失效

? 現配現用；不高壓、不反復融，4℃≤7天

10. 無陰陽對照

? 無質控，無法排除污染

? 每批次：陽性對照（標準株）+陰性對照（空白）

? 一句話總結

增菌控溫準、雙平板分離、多挑菌落、生化全做、血清+PCR雙確證、對照必做！