過氧化氫生物指示劑：標(biāo)準(zhǔn)、選型與芽孢回收

在過氧化氫蒸汽滅菌過程中，生物指示劑猶如一位隱秘而關(guān)鍵的 “檢測衛(wèi)士”，在保障著消毒效果的可靠性。今天，就讓我們一同深入探索過氧化氫生物指示劑在國內(nèi)外相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)對比、選型分析，以及不銹鋼載體型過氧化氫生物指示劑芽孢回收影響因素等方面的知識。

一、國內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)對比與選型分析

1. 載體材料的選擇

• 中國藥典（2025年版）：過氧化氫蒸汽滅菌工藝用生物指示劑可以使用各種含有玻璃、金屬或塑料的不透氣載體系統(tǒng)。纖維基質(zhì)或其他易于吸收VHP或水分的高吸附性表面可能降低VHP的濃度，對滅菌產(chǎn)生不利影響，因此，這類材料不適宜作為VHP生物指示劑的載體。

• 美國藥典（USP<55>）：載體需為惰性材料（如不銹鋼），避免材質(zhì)特性導(dǎo)致滅菌條件誤判，并強(qiáng)調(diào)需關(guān)注過氧化氫兩相態(tài)（氣態(tài)+液態(tài)）對滅菌動力學(xué)的影響。

• ISO 11138-7:未明確載體材質(zhì)要求，但需通過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其在實(shí)際滅菌場景中的適用性。

• PDA TR51指南：明確推薦不銹鋼載體作為標(biāo)準(zhǔn)配置，因其表面光滑、便于標(biāo)準(zhǔn)化操作。

結(jié)論：不銹鋼載體因化學(xué)惰性、表面光滑度和普適性，成為國內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)的首選。

2. 微生物種類的選擇

• 中國藥典（2025年版）：允許使用嗜熱脂肪地芽孢桿菌、萎縮芽孢桿菌或生孢梭菌，優(yōu)先推薦嗜熱脂肪地芽孢桿菌。

• 美國藥典（USP<1229>）：提出可根據(jù)滅菌工藝選擇嗜熱脂肪地芽孢桿菌或萎縮芽孢桿菌，兩者均對過氧化氫蒸汽具有高抗性。

• 歐洲藥典（EP）：唯一明確要求使用嗜熱脂肪地芽孢桿菌，因其更符合歐盟監(jiān)管標(biāo)準(zhǔn)。

• ISO 11138系列：未明確過氧化氫生物指示劑的微生物種類，但建議參考其他文件。

結(jié)論：全球范圍內(nèi)，首選嗜熱脂肪地芽孢桿菌。

3. 抗性選擇標(biāo)準(zhǔn)空缺

現(xiàn)行 USP<1229>中明確規(guī)定，汽化過氧化氫滅菌工藝是利用懸浮在空氣中的過氧化氫 (蒸汽) 進(jìn)行滅菌。在室溫下，過氧化氫雖是液體，但可汽化引入容器或腔室。該工藝與傳統(tǒng)滅菌氣體和液體的顯著區(qū)別在于，滅菌過程中容器內(nèi)存在多個階段，且非常適合熱敏性材料和表面滅菌，要求被滅菌物品盡可能暴露其表面。不過，蒸汽滅菌過程高度依賴過氧化氫濃度、溫度和相對濕度等參數(shù)，這些因素在暴露期間極易發(fā)生變化，進(jìn)而導(dǎo)致待處理表面相對濕度、過氧化氫濃度和冷凝率出現(xiàn)局部差異，嚴(yán)重影響工藝的滅菌效果。更棘手的是，有報道顯示氣相條件、表面條件和微生物殺滅之間并無明顯相關(guān)性，這使得在線監(jiān)測氣相濃度無法作為可靠的控制參數(shù)。由于 VHP 汽化過氧化氫滅菌工藝本質(zhì)上是氣液共存的復(fù)雜過程，難以制定統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)化生物指示劑，因此，適當(dāng)?shù)纳镏甘緞?(BI) 和耐藥性的選擇應(yīng)基于用戶系統(tǒng)內(nèi)的實(shí)驗(yàn)。只有在藥劑濃度、濕度、溫度、基材和相位等特定條件均被明確界定的情況下，才有可能確定可靠的 D 值。然而到目前為止，沒有一個標(biāo)準(zhǔn)明確列出過氧化氫生物指示劑確切的 D 值范圍，這無疑給相關(guān)產(chǎn)品的質(zhì)量把控和應(yīng)用帶來了一定的挑戰(zhàn)。在實(shí)際操作中，操作人員只能憑借經(jīng)驗(yàn)和部分參考數(shù)據(jù)來判斷生物指示劑的抗性是否符合要求，這在一定程度上增加了消毒驗(yàn)證結(jié)果的不確定性。

二、不銹鋼載體型過氧化氫生物指示劑芽孢回收影響因素

1. 稀釋液選擇：0.1%吐溫80水溶液最優(yōu)

• 0.1%吐溫80水溶液：芽孢回收率118.25%（最高）；

• 生理鹽水：僅15.50%（抑制芽孢生長）；

• 純化水：75.33%（表面活性不足）。

總結(jié)：《中國藥典》要求，總芽孢計數(shù)的稀釋液為無菌純化水或其他經(jīng)過驗(yàn)證的無菌溶液，驗(yàn)證結(jié)果顯示，0.9% NaCl 稀釋液會使芽孢回收率降低，可能與 NaCl 溶液既可抑制芽孢桿菌生物膜的形成有關(guān)，又會抑制芽孢的生長；0.1% 吐溫 80 水溶液為稀釋液的芽孢回收率最高，可能是因?yàn)槲⑸锉砻娲嬖诤芏嘤H水和疏水基團(tuán)，表面活性劑能夠與疏水基團(tuán)相結(jié)合，暴露親水點(diǎn)位，從而增加細(xì)胞表面疏水性，改變微生物細(xì)胞的親和性。

2. 超聲處理優(yōu)化：40分鐘為臨界點(diǎn)

• 超聲20分鐘：回收率74.50%；

• 超聲40分鐘：回收率105.25%；

• 超聲60分鐘：回收率81.86%；

• 超聲80分鐘：回收率72.35%。

總結(jié)：超聲時間對芽孢回收率影響的分析結(jié)果表明，超聲處理 40 min 達(dá)到最高值，之后芽孢回收率逐漸降低，這種現(xiàn)象可能是因?yàn)殡S著超聲時間的增加，芽孢的抵抗力顯著降低，使芽孢在操作過程中更易失活，從而導(dǎo)致芽孢回收率降低。

3.浸泡時間選擇：2小時平衡點(diǎn)

• 浸泡0h：回收率35.63%；

• 浸泡1h：回收率71.15%；

• 浸泡2h：回收率91.90%；

• 浸泡3h：回收率71.50%；

• 浸泡4h：回收率70.25%。

總結(jié)：從浸泡時間參數(shù)變化后的研究結(jié)果來看，浸泡 2 h 的條件下，芽孢回收率最高。而浸泡 2 h 后，芽孢回收率隨著時間的延長逐漸降低，可能是因?yàn)檠挎唛L時間浸泡于稀釋液中，芽孢核心的水分含量改變，從而導(dǎo)致芽孢抵抗力降低 ，且長時間浸泡下可能會使部分芽孢復(fù)蘇，形成細(xì)菌繁殖體，在熱激（95℃下）后細(xì)菌繁殖體被殺滅，最終使總芽孢回收率降低。

過氧化氫生物指示劑在國內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)、選型以及芽孢回收等方面都有著豐富且關(guān)鍵的知識體系。希望通過今天的分享，能讓大家對這一領(lǐng)域有更深入的了解，為大家實(shí)際工作中的應(yīng)用提供有力的支持。