支原體污染，你可能正在用它做實驗卻不自知

細胞培養里最可怕的事情是什么？

不是細胞不長了，不是培養基變黃了，也不是顯微鏡下看到密密麻麻的細菌。這些你都看得見，知道出了問題，可以及時處理。

最可怕的是：細胞看起來好好的，培養基澄清透明，顯微鏡下干干凈凈，但污染已經存在了。

這就是支原體污染。

它不會讓你的培養基變渾濁，不會在顯微鏡下現形，但它會悄悄改變細胞的代謝、影響基因表達、干擾實驗結果。你可能用被污染的細胞做了幾個月實驗，發表了一篇論文，然后發現——所有數據都不可靠了。

支原體是目前已知最小的原核生物，沒有細胞壁，直徑只有0.1到0.3微米。普通顯微鏡根本看不到它，0.22微米的濾膜也攔不住它。它能通過常規的無菌操作檢測，悄悄地潛伏在你的細胞里。

被支原體污染的細胞不會突然死亡。它更像是“慢性中毒”：細胞長得比以前慢了，傳代后貼壁需要更長時間，轉染效率莫名下降，流式細胞儀的背景信號偏高，做PCR的時候莫名其妙多了條帶。如果你發現細胞狀態“說不清楚哪里不對，但就是不如以前好了”，支原體污染是首先要排除的可能。

支原體對實驗的干擾是全方位的。它會消耗培養基里的精氨酸和葡萄糖，讓細胞營養不良；它會改變細胞膜的組成，影響轉染效率；它會誘導或抑制某些基因的表達，讓你的qPCR結果不準；它還會影響細胞周期和凋亡，讓功能實驗的數據完全偏離。

更麻煩的是，支原體污染會“傳染”。一瓶細胞被污染了，在超凈臺里操作的時候，支原體會隨著氣溶膠飄到其他培養瓶里。幾周之后，整個細胞房的所有細胞可能都被污染了。

很多人覺得“我的細胞狀態挺好的，應該沒污染”。這個想法很危險。狀態好不代表沒污染。有些細胞系對支原體不敏感，看起來長得很好，但實際上已經成了支原體的“宿主”。你把這樣的細胞送給別人，或者自己用來做實驗，問題就擴散開了。

定期檢測是唯一的辦法。建議每個月做一次支原體檢測，或者每次從液氮復蘇一批新細胞之后，先檢測再使用。檢測方法有很多種：PCR法最常用，靈敏度高，能區分支原體種類；熒光染色法直觀，在顯微鏡下能看到細胞核周圍的熒光斑點；還有培養法和生化檢測法，各有優缺點。選一種適合實驗室條件的方法，固定下來，堅持做。

如果檢測出支原體陽性，怎么辦？如果細胞不珍貴，直接扔掉，徹底清潔培養箱和超凈臺。如果細胞非常珍貴，可以用支原體清除試劑處理，市面上有很多種，通常需要處理1-2周。處理之后一定要復檢，確認陰性了才能繼續使用。

預防比處理重要得多。嚴格的無菌操作是基礎，每次操作前后用酒精擦拭臺面，避免交叉污染。定期清潔培養箱和水盤，不要讓支原體有生存空間。新引進的細胞系，不管是別人給的還是從細胞庫買的，都要先隔離培養，檢測確認陰性后再進入常規培養體系。

支原體污染最可怕的地方在于“看不見”。你可以用最好的試劑、最標準的操作、最嚴格的流程，但只要細胞里有支原體，所有實驗都是在“測污染物”而不是在“測細胞”。

所以，如果你的實驗最近總是莫名其妙地重復不出來，細胞狀態也說不上來哪里不對，不妨做一次支原體檢測。也許你會發現，問題不在你的操作，不在你的試劑，而在那瓶看起來“好好的”細胞里。