微生物實驗室菌株的保存、復蘇與銷毀方法匯總

一、菌株保存方法?

1、短期保存（1-6個月）?

斜面/平板低溫保存?

步驟?：接種菌株至固體培養基，培養后封口膜密封，4℃保存。

適用菌種?：細菌、真菌。

保存時間?：1-3個月。

注意事項?：定期傳代，避免培養基干燥。

液體培養基保存?

步驟?：菌液接種至液體培養基，培養后密封，4℃保存。

適用菌種?：快速生長的細菌。

保存時間?：1-2個月。

半固體穿刺保存?

步驟?：穿刺接種至含0.5%瓊脂的培養基，覆蓋無菌石蠟油，4℃保存。

適用菌種?：兼性厭氧菌。

保存時間?：3-6個月。

2、長期保存（6個月以上）?

甘油冷凍保存?

步驟?：菌液與20%-30%無菌甘油混合，分裝至凍存管，-80℃保存。

適用菌種?：細菌、酵母菌。

保存時間?：1-5年。

注意事項?：避免反復凍融。

凍干保存（冷凍干燥）?

步驟?：菌懸液加入保護劑（如脫脂牛奶），預凍后真空干燥，-20℃或4℃保存。

適用菌種?：絕大多數細菌、放線菌、真菌。

保存時間?：10年以上。

液氮保存（超低溫）?

步驟?：菌液與冷凍保護劑（如DMSO）混合，程序降溫后投入液氮（-196℃）。

適用菌種?：細胞系、脆弱微生物。

保存時間?：10年以上。

磁珠/凍存管保存?

步驟?：菌液吸附于無菌磁珠，干燥后密封保存于-80℃。

適用菌種?：細菌、真菌。

二、菌株復蘇方法?

1、冷凍菌株復蘇?

步驟?：

從-80℃或液氮中取出凍存管，迅速置于37℃水浴解凍（<1分鐘）。

取菌液接種至新鮮培養基，適宜溫度培養。

注意事項?：避免高溫長時間解凍，嚴格無菌操作。

2、凍干菌株復蘇?

步驟?：

無菌環境下打開安瓿瓶，加入0.5-1mL液體培養基溶解。

吸取菌液接種至固體/液體培養基，培養觀察。

3、斜面/穿刺菌株復蘇?

步驟?：直接挑取菌苔接種至新培養基。

三、菌株銷毀方法?

1、高壓蒸汽滅菌?

步驟?：121℃、15-30分鐘處理菌液、培養基及污染材料。

適用對象?：非極端耐熱菌、培養基廢棄物。

2、化學滅活?

步驟?：使用10%次氯酸鈉、75%乙醇或過氧乙酸浸泡30分鐘以上。

適用對象?：工作臺、器械表面殘留菌液。

3、焚燒處理?

步驟?：高溫焚燒（>800℃）菌種凍干粉或污染嚴重的固體材料。

適用對象?：高致病性菌株、孢子類微生物。

4、生物滅活?

步驟?：紫外線照射30分鐘以上或臭氧處理。

四、注意事項?

生物安全?：根據病原微生物危害等級（BSL-1至BSL-4）選擇防護措施。

記錄管理?：詳細記錄菌株保存位置、時間及銷毀信息。

法規合規?：特殊菌株（如致病菌）銷毀需遵循《病原微生物實驗室生物安全管理條例》。

定期驗證?：長期保存的菌株需定期復蘇檢測活性及純度。

五、總結?

正確的保存、復蘇與銷毀是保障實驗可重復性和生物安全的關鍵。需根據菌種特性選擇合適方法，嚴格遵守操作規范，并做好全程記錄。高致病性菌株務必在專業生物安全實驗室處理。