“菌落蔓延”毀掉整個平板？預防與補救指南！

菌落蔓延確實是微生物實驗中的“噩夢”。別擔心，針對這個老大難問題，有效的預防策略和發生后的補救方法都很明確。

 為什么會發生菌落蔓延？

通常，蔓延是以下一個或多個因素共同作用的結果：

預防指南

預防的核心是“控制水分、阻止擴散、優化操作”。

1. 核心操作流程優化

• 及時傾注與混勻：樣品稀釋后，在30分鐘內完成傾注并立即搖勻，防止菌體聚集。

• 確保平板干燥：傾注前，將空平皿在潔凈工作臺內倒置晾干；傾注凝固后，可置于37℃烘箱短時烘干，或倒置于超凈工作臺內吹干表面冷凝水。

• 堅持倒置培養：除非標準強制要求正置（如霉菌檢驗），否則一律采用倒置培養，這是防止冷凝水滴落導致蔓延的最基本措施。

2. 抑制蔓延的物理與化學方法
當懷疑樣品中含有易蔓延菌時，可主動采用以下方法：

• 瓊脂覆蓋法（推薦）：在已凝固的培養基表面，再覆蓋一薄層（約4mL）無菌瓊脂。這層瓊脂能限制好氧菌的表面遷移，并固定已生長的菌落。研究證實此法能顯著減少蔓延。

• 使用TTC：在培養基中加入適量TTC（氯化三苯基四氮唑）。細菌生長時會將其還原為紅色，不僅便于觀察，TTC本身也有一定抑制蔓延的作用。

• 加蓋陶瓦蓋：在培養皿上蓋內部加上一個無菌的陶瓦蓋，可以吸收冷凝水。但需注意，此法可能導致平板邊緣干裂。

3. 針對霉菌等特殊微生物的防控
霉菌檢測常需正置培養，污染和孢子擴散風險更高。

• 加強培養箱消毒：定期用75%酒精或新潔爾滅擦拭，并開啟紫外線消毒。

• 驗證污染源：若頻繁污染，可做空白對照試驗（如用自封袋密封部分平板）來排查是培養箱還是操作環境的污染。

發生蔓延后的補救計數方法

如果預防失敗，仍可嘗試對平板進行挽救性計數：

1. 選擇可計數區域：仔細觀察，嘗試計數蔓延區域邊緣的分散、獨立菌落。

2. 覆蓋瓊脂固定法：若菌落仍在表層擴散，可將已蔓延的平板在生物安全柜中打開，小心倒入一層冷卻至45-50℃的無菌瓊脂，覆蓋原有菌落。凝固后，下層被固定的菌落將停止蔓延，便于計數。

3. 判斷與報告：

   若蔓延面積超過平板面積的1/2，或經補救仍無法準確計數，應舍棄該平板數據。
   
   
   在實驗記錄和報告中，需明確注明“存在蔓延生長”，并說明計數方法或舍棄原因，以保證數據的真實性和可追溯性。

重要提醒

• 生物安全：所有發生蔓延、疑似污染或已結束培養的平板，都必須經過高壓蒸汽滅菌后，再交由專業機構處理，不可隨意丟棄。

• 結果有效性：若所有平行平板均因蔓延而無法計數，本次實驗數據無效，必須從樣品稀釋重新開始實驗。

總的來說，解決菌落蔓延的關鍵在于嚴格規范操作以預防，并掌握覆蓋瓊脂等有效的抑制與補救技術。根據你的具體實驗（如常規菌落總數計數、霉菌酵母計數或

質粒轉化涂板），側重點會有所不同。